Научное изыскательское исследование

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.............................................................................. 3

ВВЕДЕНИЕ..................................... _{v......................................................................................................} 4

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................... 9

1.1 Антитела к эндогенным соединениям и их физиологическая роль........ 9

1.2 Содержание и роль аутоантител при патологии................................... 13

1.2.1 Содержание и роль аутоантител при аутоиммунной патологии...... 13

1.2.2 Содержание и роль аутоантител при заболеваниях неаутоиммунной
природы.............................................................................................. 21

1.3 Факторы, влияющие на содержание аутоантител................................. 29

1.3.1 Содержание аутоантител в зависимости от пола

и физиологического состояния организма....................................... 29

1.3.2 Влияние факторов внешней среды на содержание аутоантител....... 33

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ..................... 39

2.1 Общая характеристика обследованных лиц................................................. 39

2.2.Методы исследования показателей иммунного гомеостаза и

математической обработки результатов.................................................... 43

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ...................... 52

3.1 Содержание аутоантител и особенности иммунологической
реактивности у практически здоровых людей................................................... 52

3.2 Содержание аутоантител и особенности иммунологической
реактивности у больных............................................................................. 69

3.3 Взаимосвязи изучаемых аутоантител

с иммунологическими показателями периферической крови.................. 94

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.......................................................................................... ПО

ВЫВОДЫ................................................................................................... 123

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.......................................................... 124

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................................................... 125

ПРИЛОЖЕНИЕ........................................................................................... 148

3 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CD5⁺ - общая популяция Т-лимфоцитов

CD3⁺ — зрелые Т-лимфоциты

CD4⁺ — Т-хелперы

CD8⁺ - цитотоксические Т-лимфоциты

CD10⁺ — ранний антиген В-клеток, предшественников В-лимфоцитов

CD16⁺ — естественные киллеры

CD25⁺ - Т-лимфоциты с рецепторами к интерлейкину-2

CD71⁺ — Т-лимфоциты с рецептором к трансферрину

HLA DR⁺ - Т-лимфоциты, активированные к сублокусу Главного

комплекса гистосовместимости класса II

CD95⁺ — рецептор апоптоза

CD22⁺ - В-лимфоциты

РБТЛ -реакция бласттрансформации лимфоцитов

ФГА — фитогемагглютинин

ИД - индекс дифференцировки

ИП — индекс пролиферации

ААТ - аутоантитела

ds - DNA -двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота

RNP - рибонуклеопротеиды

АутоГемА - аутогемагглютинины

АутоЛейкА - аутолейкагглютинины

РЭА — раково-эмбриональный антиген

Ig - иммуноглобулин

IL-1 -интерлейкин-1

IL-2 - интерлейкин-2

TNFa — фактор некроза опухоли альфа

IFN-y - интерферон гамма

4 ВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Изучение аутоантител является актуальной задачей современной иммунологии. Несмотря на то, что антитела к эндогенным антигенам известны уже давно [26,159,192], долгое время обнаружение в сыворотке антител к собственным структурам организма считалось признаком аутоиммунного расстройства.

Многочисленные данные литературы о наличии аутоантител и их концентрациях касаются преимущественно материалов обследования больных аутоиммунными заболеваниями. Они свидетельствуют о довольно широких пределах частоты выявления аутоантител при наличии явно выраженных проявлений аутоиммунных процессов [32,42,79,80,82,83,95,180]. Появление аутоантител в большинстве случаев рассматривается как срыв в работе механизмов, ответственных в норме за иммунологическую толерантность к аутологичным структурам. Вместе с тем установлено, что наличие в организме аутоантител не является фактором, достаточным для запуска аутоиммунного процесса [34,38,100,115,165]. Появляются отдельные сведения о нарастании уровня некоторых аутоантител при онкологических, инфекционных, аллергических заболеваниях [13,33,60,113,125,141,152, 189,217] и приема лекарственных препаратов [23,146]. Научные публикации, касающиеся исследований содержания аутоантител у практически здоровых людей, немногочисленны и носят предположительный характер. Показано увеличение содержания аутоантител при стрессе, физических нагрузках, перегрузках, в период полового созревания, при нормальном течении беременности и при климаксе, при воздействии малых доз радиации [12,37,38,39,52,53,68,108]. Вопрос о разграничении нормы и патологии содержания аутоантител, их спектра и концентраций остается открытым; физиологическая роль аутоантител в регуляции гомеостаза не установлена.

Все вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

5 Цель и задачи исследования. Цель работы - установить содержание и

физиологическую значимость аутоантител в регуляции иммунного гомеостаза у жителей Севера Европейской территории РФ.

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:

1. Установить содержание и частоту регистрации повышенных уровней
аутоантител (аутоантител к двухспиральной ДНК, нуклеопротеидам,
тромбоцитам, аутогемагглютинины, аутолейкоагглютинины) у
практически здоровых жителей Севера Европейской территории РФ.

2. Изучить зависимость частоты выявления и концентрации аутоантител
в сыворотке крови практически здоровых лиц от сезона года.

3. Определить различия в содержании изучаемых в работе аутоантител от
возраста и пола.

4. Выявить особенности иммунологической реактивности формирования
аутосенсибилизации.

Положения, выносимые на защиту.

1. У жителей Севера Европейской территории РФ определяется
широкий спектр аутоантител различной специфичности, регистрируется более
высокий уровень средних концентраций и частота повышенного их
содержания.

2. Средние концентрации и частота регистрации аномально высоких
концентраций аутоантител нарастают в зимний период с периода
биологических сумерек в ноябре, достигая максимума в феврале, и снижаются
в мае, в период восстановления естественной солнечной активности.

3. Уровень содержания и частота регистрации повышенных
концентраций аутоантител увеличивается с возрастом, наиболее значимое
нарастание содержания аутоантител регистрируется с 60 лет вне зависимости
от пола.

4. Повышение уровня аутоантител выше пределов нормального
содержания происходит на фоне реакций со стороны провоспалительных

цитокинов и подавления процессов активизации, дифференцировки и апоптоза иммунокомпетентных клеток.

5. Регуляторная роль аутоантител по элиминации устаревших клеток и продуктов их распада осуществляется с активизацией системы комплемента, а также пролиферации и дифференцировки системы моноцитов.

Научная новизна исследования. Впервые установлен спектр, содержание и частота регистрации повышенных концентраций аутоантител по специфичности у жителей Севера Европейской территории РФ. Определена зависимость содержания аутоантител от сезона и фотопериодичности, выявлено повышение концентраций аутоантител в период окончания биологических сумерек. Впервые установлена возрастная динамика содержания и спектра аутоантител. Выявлено, что повышение уровней и раширение спектра содержания аутоантител происходит при подавлении уровня Т- и В-клеточной пролиферации и дифференцировки. Впервые дана сравнительная характеристика содержания аутоантител у практически здоровых лиц и лиц с аутоиммунной патологией, аллергическими, онкологическими, хроническими воспалительными заболеваниями и в раннем послеоперационном периоде.

Впервые установлен механизм участия аутоантител в процессах утилизации продуктов некробиоза за счет активации системы комплемента классическим и альтернативным путем, а также пролиферации и дифференцировки моноцитов.

Научно-практическая значимость исследования. Установленные физиологические пределы содержания различных по специфичности аутоантител, могут быть использованы для оценки результатов исследования и дифференциальной диагностики аутоиммунных процессов.

Полученные сведения о весенне-осеннем сезонном изменении уровня аутоантител являются основанием для организации лечебно-профилактических мероприятий по профилактике экологически зависимых иммунодефицитов, сезонных обострений заболеваний на основе сорбционной

7 терапии и стимуляции процессов дифференцировки иммунокомпетентных

клеток.

Выявленные взаимосвязи между содержанием аутоантител и ЦИК могут быть использованы в качестве скринингового диагностического критерия аутосенсибилизации.

Полученные данные могут быть использованы в научных исследованиях в области иммунологии, экологической медицины, клинической медицины, при решении вопросов экологического районирования, а также - в учебном процессе медицинских академий или университетов на кафедрах биологии, микробиологии с курсом иммунологии, клинической иммунологии, внутренних болезней.

Результаты исследования используются врачами медицинской компании «Биокор» при проведении дифференциальной диагностики заболеваний и в качестве критерия эффективности лечебно-профилактических мероприятий (акт внедрения от 20.04.2004г.).

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004г); II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергологии (Москва, 14 - 17 мая, 2004 г.); на III съезде иммунологов России (Екатеринбург, 31 мая - 4 июня, 2004 г.); на симпозиуме с международным участием «Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям Севера» (Сыктывкар, 1- 3 июня, 2004 г.); на XIX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, (Екатеринбург, 19-24 сентября, 2004 г.); доложены на VIII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2004» (Санкт-Петербург, 27-30 сентября 2004 г.).

Данная работа выполнена в Институте физиологии природных адаптации УрО РАН (г. Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.00101811).

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Антитела к эндогенным соединениям и их физиологическая роль

Несмотря на то, что антитела к эндогенным антигенам известны уже давно, долгое время обнаружение в сыворотке антител к собственным структурам организма считалось признаком аутоиммунного расстройства. Однако с развитием различных иммунологических методов выявления аутоантител, наиболее чувствительный и употребимый из которых твердофазный иммуноферментный анализ, а также благодаря использованию аффинной хроматографии для обогащения специфических антител в нормальных сыворотках человека и животных были обнаружены антитела практически ко всем группам эндогенных антигенов. Исследования последних лет показывают, что любое воздействие на организм, сопровождаемое изменением содержания эндогенных медиаторов, вызывает увеличение содержания антител к данным соединениям [66,88,159,192].

Все многообразие известных в настоящее время аутоантител условно можно разделить на 3 группы. Первую группу составляют антитела, которые содержаться в относительно высокой концентрации в нормальной сыворотке и могут быть легко выявлены без предварительного обогащения. Эти антитела обладают, как правило, узкой специфичностью и способны различать близкие по структуре детерминанты, например углеводные маркеры групп крови. Антитела данной группы представлены преимущественно IgM. К ним можно отнести изоагглютинины, антиэритроцитарные антитела [49], антитела к аутологичным IgG [155] и IgA [174].

Для антител второй группы характерны невысокое содержание в сыворотке и полиспецифичность. Выявление их стало возможным главным образом с развитием иммуноферментных методов. Круг этих антител достаточно широк и постоянно растет в результате исследований последних лет. К настоящему времени описано около 200 аутоантител. Обнаружены антитела как к высокомолекулярным антигенам, например ДНК [181,204], к

10 нуклеотидам [126,187], белкам цитоскелета [213], сывороточному альбумину

[77], мембранным белкам (например, цитохрому С) [158], к белкам сыворотки крови [158,202], ферментам [122,151,203], гормонам [133,172,196,213], рецепторам [132,135,169], пептидам [116,167], так и низкомолекулярным соединениям (например, фосфолипидам, фосфотидной кислоте, серотонину, ганглиозидам, динитрофенолу) [131,185,207].

К третьей группе относятся антиидиотипические антитела.

Необходимо отметить, что в настоящее время исследования антител к эндогенным соединениям в основном развиваются в двух направлениях. Одно из них связано с выявлением повышенных концентраций аутоантител, проявляющих патогенное действие при различных аутоиммунных расстройствах [10,83,90,100,158,117]. Другое направление касается непосредственно изучения естественных, или природных аутоантител в норме и при различных заболеваниях, не относящихся к аутоиммунным, и характеризующихся прежде всего нарушением метаболизма соответствующего аутоантигена [63,77,85,88,96,121]. Они отличаются от аутоантител, ассоциированных с аутоиммунными заболеваниями своей полиреактивностью, более низкой авидностью к аутоантигенам, принадлежат, как правило, к IgM - изотопу и кодируются немутировавшими зародышевыми V-генами. Такого рода аутоантитела, рассматриваются рядом исследователей как ранний предвестник аутоиммунных нарушений, сохраняющий на определенном промежутке времени своего рода «нейтралитет», необходимый для сохранения равновесия между состоянием здоровья и аутоиммунной патологией [100,115,184,214]. В тоже время авторы не отрицают, что повышенное содержание таких аутоантител может явиться одним из признаков аутоиммунного заболевания [156,216]. Так, считают, что аутоантитела к ДНК и фосфолипидам при СКВ являются аутоантителами, что отражает патологическую природу таких аутоантител в отличие от естественных антител к ДНК и фосфолипидам, обнаруживаемых у здоровых лиц [78]. Как видно деление такого рода очень условно. Существующие

мнения, что следует различать естественные или природные, нормальные или защитные антитела, свободные и скрытые, агрессоры и свидетели, что патологическое значение имеют только термостабильные аутоантитела, не однозначны [3,77,88,90,96,107]. Исследования, проведенные в отделе экологической иммунологии ИФПА УроРАН проф. Л.К.Добродеевой не установили какие-либо различия свойств антител в зависимости от вида и условий постановки реакций. При этом установлено, что влияние аутоантител определяется, в первую очередь, их излишней концентрацией [39]. Установлено, что превышение физиологического барьера содержания аутоантител приводит к повреждению аналогичных структур путем антителозависимого лизиса, который в свою очередь вызывает каскад реакций различного воспалительного характера. Изменение границ толерантности к своим собственным структурам вне зависимости от механизмов формирования этого процесса ведет к последствиям, именуемым аутоиммунными [37,39,82,140]. Расширение предела физиологического отклонения делает грань между физиологической реакцией и патологией хрупкой, прозрачной. Чем дальше заходит процесс, тем выше концентрация аутоантител, тем шире и разнообразнее их спектр [35,38].

Один из аспектов вопроса о физиологической роли антител были подробно освещены С. Бойденом еще в 1966 году [137]. Автор рассматривал их как «узнающие факторы». Считают, что функция первичного узнавания следует из самой природы антител. Опосредованное первичное узнавание является эффекторной функцией создания барьера на пути чужеродных агентов, прежде всего бактерий и вирусов: антителозависимый лизис, осуществляемый киллерами или системой комплемента, вирус-нейтрализация, опсонизация и активация компонентов комплемента, вызывающих положительный хемотаксис макрофагов. В то же время первичное узнавание квалифицируют и как индукторную функцию, поскольку осуществление перечисленных выше эффекторных функций необходимо главным образом для стимуляции макрофагальной активности по отношению к чужеродным

12 антигенам и индукции «вторичного» узнавания, т.е. собственного иммунного

ответа [34,170,208].

Еще в 1960 году П.Грабар высказал мнение [26,159], которое поддерживается и другими исследователями [34,82,83,89,115], о том, что аутоантитела способствуют связыванию и удалению из организма продуктов клеточного метаболизма, и что аутоантитела имеют широкое значение как белки, транспортирующие любые метаболиты. Представление о роли аутоантител в выведении из организма стареющих, балластных белков было подтверждено обнаружением естественных анти-альбуминовых антител [202], а также аутоантител к гликозилированному альбумину [40], поскольку известно, что увеличение гликозилирования белков отражает процесс их старения [77].

Не исключают, что аутоантитела, обнаруживаемые в норме, могут играть гомеостатическую функцию (например, обнаружение аутоантител к Т₃-трийодтиронину у лиц с бессимптомным увеличением щитовидной железы, или антитела к фосфолипидам, которые были выявлены и в нормальных сыворотках) [186,207].

Таким образом, выделяют следующие функции аутоантител: первичного узнавания, патогенетическую и гомеостатическую [34,77,137,159,207,202]. Предполагают, что потенциально аутоантитела могут выполнять все 3 функции, но в зависимости от физиологического состояния организма и изменения его антигенного состава проявляется преимущественно одна из них. Кроме того, разные виды аутоантител (по специфичности, принадлежности к классам иммуноглобулинов) могут различаться и видом функциональной активности [64].

Признается, что аутоиммунный ответ в физиологических условиях - нормальный процесс [34,104]. Несмотря на полученные, главным образом в последние годы важные сведения о аутоантителах, многое, и, причем наиболее существенное, остается невыясненным: нерешен вопрос о функциях аутоантител в норме, не изучены механизмы регуляции синтеза аутоантител;

13 не ясен характер и механизмы связи между продукцией аутоантител и

метаболизмом их антигенов-мишеней. Однозначно признается, что роль аутоантител остается до настоящего времени мало изученной.

1.2 Содержание и роль аутоантител при патологии

1.2.1 Содержание и роль аутоантител при аутоиммунной патологии Аутоиммунным процессам принадлежит важная роль в патологии человека [17]. Аутоиммунная и иммунокомплексная патология развивается при весьма широком спектре заболеваний внутренних органов, представленных практически во всех разделах внутренней медицины.

Установлено, что в развитии чувствительности к аутоиммунным заболеваниям определенную роль играют гены ГКГС и гены, определяющие аномальное развитие органов-мишеней [115,201]. Общим признаком подавляющего большинства аутоиммунных болезней независимо от причин и механизмов нарушения иммунорегуляции является В-клеточная активация (поликлональная или аутоантигенспецифическая), приводящая к гиперглобулинемии и избыточному образованию аутоантител с разной специфичностью [82]. Полагают, что выработка аутоантител к некоторым клеточным антигенам, в первую очередь к ДНК, запрограммирована в иммунной системе на уровне V-генов и эти ААТ являются компонентом нормального В-клеточного «репертуара» [76,129,204]. По мнению других исследователей, появление ААТ связано с соматической мутацией V-генных сегментов, кодирующих продукцию антител к бактериальным антигенам [90], или с активацией идиотипической сети на фоне вирусной инфекции [53,192]. В некоторых случаях выработка аутоантител может быть следствием нормального иммунного ответа на экспансию чужеродных организмов или субстанций, содержащих полисахариды, у которых выявляется перекрестная реактивность с аналогичными структурами организма человека [115,200]. Так, показано, что молекулярная мимикрия является одним их механизмов, с помощью которого вирусы могут играть роль в аутосенсибилизации при ряде

аутоиммунных заболеваний (например, сахарном диабете 1 типа, оказывая гуморальное воздействие на аутоантигены клеток островков поджелудочной железы) [149]. Существует мнение, что, связываясь с нормальными иммуноглобулинами, гистоны выступают в роли кофактора и придают им способность реагировать с ДНК, фосфолипидами, бактериальными липополисахаридами, инсулином, некоторыми антигенами ВИЧ-1 и тимоцитами. То есть, полиспецифичность некоторых природных антител может быть обусловлена комплексообразованием между молекулами иммуноглобулина и гистона [1].

В случае ДНК-связывающих аутоантител как наиболее полно изученного семейства природных аутоантител, обладающих выраженным патогенным потенциалом, их исходная специфичность детерминируется генами зародышевой линии, хотя соматические мутации также вносят определенный вклад в процесс созревания и формирования ДНК-связывающих аутоантител очень высоких уровней специфичности и авидности [100]. Следует также отметить, что в случае аутоантител к двухспиральной ДНК и антителам к фосфолипидам может идти речь об одних и тех же антителах, так как было показано, аутоантитела к ДНК перекрестно реагируют с фосфолипидами и фосфатидной кислотой [193]. При тромбоцитопенической пурпуре выявлены антикардиолипиновые антитела [123]. В исследованиях, проводимых Институтом Ревматологии МЗ РФ, была установлена высокая частота ложноположительных реакций при изучении антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотках больных СКВ [96,82]. Авторы объясняют это явление со способностью антител к ДНК неспецифически реагировать с антигенными детерминантами вирусов иммунодефицита человека.

В большинстве исследований, посвященных антителам, приводятся данные относительно принадлежности их к тому или иному классу иммуноглобулинов [134]. Так, более 80% аутоантител относится к ряду антигенов, среди которых аутологичны IgG, ДНК, тиреоглобулин и др.,

представлены IgM [174]. В тоже время для ряда аутоантител (в том числе и к тиреоглобулину) было установлено обратное соотношение: IgG преобладали над IgM [154,158]. Таким образом, единой точки зрения на распределение антител по классам иммуноглобулинов на сегодняшний день не существует, возможно, что это распределение во многом зависит от вида (специфичности) антител. Установлено, что на относительно ранних стадиях заболевания наблюдается гиперпродукция главным образом IgM-аутоантител, тогда как экспансия IgG-секретируемых В - клонов характерна для более зрелой стадии развития заболевания [77,88,166,168]. Однако, обращает внимание тот факт, что у пациентов с СКВ со сниженным уровнем IgM-антител может быть выраженный люпус-нефрит [88],

Есть предположения, что клетки, проходящие апоптоз, являются главным источником аутоантигенов при ряде аутоиммунных заболеваний, включая СКВ, т.к. при аутоиммунных процессах нарушается механизм клиренса апоптотических клеток, что сопровождается освобождением аутоантигенов в циркуляцию [183,215]. Описаны нарушения чувствительности лимфоцитов к апоптозу in vitro при некоторых аутоиммунных заболеваниях, таких как СКВ, ревматоидный артрит, аутоиммунный диабет. Больные с СКВ имеют повышенный уровень растворимой формы Fas, которая может ингибировать взаимодействие Fasl-Fas. Вызванное этим снижение Fas-опосредованного апоптоза может способствовать накоплению аутоиммунных клеток [215]. Выявлена также связь между синтезом антител к кардиолипину и апоптозом [54]. В исследованиях было показано, что антитела к фосфолипидам обладают способностью связываться с поверхностью эндотелиальных клеток, подвергнутых апоптозу [54,142].

Второй путь путь появления аутоантигенов считают, что связан с прямой атакой ДНК антителами с ферментативной активностью (абзимами) [211]. Вместе с тем наличие в организме ДЬЖ-связывающих аутоантител не

является фактором, достаточным для запуска аутоиммунного процесса [35,76,211,214].

Результаты проведенных исследований отечественных и зарубежных
авторов, однозначно свидетельствуют о том, что при большинстве
аутоиммунных болезней наблюдаются достаточно стереотипные изменения, в
том числе Т-лимфопения, нарушение нормального соотношения
иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, снижение

пролиферативного ответа лимфоцитов на митогены, нарушение супрессорной активности по данным функциональных тестов и, наконец, депрессия клеточных цитотоксических реакций [14,43,82,83,116,195]. Некоторые авторые отмечают изменение уровня содержания компонентов комплемента при диффузных заболеваниях соединительной ткани [160]. Однотипность изменений клеточных иммунных реакций не позволяет использовать эти параметры для диагностики и дифференциальной диагностики аутоиммунных болезней, в виду чего основными исследовательскими направлениями являются выявление специфических аутоантител. Тем не менее, многими авторами признается, что изучение взаимосвязи нарушений клеточного иммунитета с выработкой аутоантител представляет несомненный интерес для расшифровки патогенетических механизмов аутоиммунных болезней [42,118].

Выявлены прямые корреляционные взаимосвязи между содержанием аутоантител к нативной ДНК и IL-ip, IL-4, IgA, ЦИК и свободными радикалами кислорода в крови и синовиальной жидкости у больных с остеоартрозом, которые отражают патогенетическую взаимосвязь между развитием деструктивных, воспалительных процессов и активацией гуморального иммунного ответа у больных остеоартрозом коленных суставов [75,120].

Исследователи Бостонского университета показали, что кроме аутоантител, в патогенезе эрозивного артрита участвуют компоненты комплемента и Fc-рецепторы у мышей, дефицитных по тучным клеткам.

17 Предполагают, что тучные клетки могут явиться мостиком между

аутоантителами, растворимыми медиаторами и другими факторами при воспалительном артрите [114]. Выявлена значительная положительная корреляция между уровнем интерлейкина-10 и титрами ревматоидного фактора, аутоантителами при первичном синдроме Шегрена [173]. Установлено участие IL-10 в образовании патогенных аутоантител и развитии СКВ [212]. Установлена роль супрессорного действия CD4+ Т-лимфоцитов на развитие аутоиммунного ответа при гемолитической анемии в присутствии интерлейкина-10 [144]. При исследовании больных с болезнью Грейвса с повышенным содержанием антитиреоидных аутоантител, по сравнению с контролем, в сыворотке больных существенно выше содержание интерферона- у, а уровни IL- 2 и TNF-a не изменены [145]. Установлено, что у больных с витилиго аутосенсибилизация протекает на фоне выраженной активизации В-лимфоцитов в сочетании с повышенным апоптозом Т-лимфоцитов [143].

В литературе имеются немногочисленные сведения о повышении содержания реагинов при аутоиммунных заболеваниях. Так, обострение демиелинизирующего процесса при рассеянном склерозе (PC) сопровождается активацией IgE системы иммунитета, которая в свою очередь коррелирует с более тяжёлым течением заболевания. В период обострения заболевания у 89% пациентов регистрировались повышенные уровни IgE, в период ремиссии IgE антитела к миелину не определялись, уровень IgE и IL-4 были в норме [20].

Уровень IgE бывает повышен при диффузных заболеваниях соединительной ткани - системной красной волчанке [95], и других ревматических болезнях - активном ревматоидном артрите, болезни Шегрена, болезни Бехтерева [83]. Практически всегда содержание реагинов повышено при узелковом периартериите и других эозинофильных системных васкулитах [79].

18 Имеются исследования, свидетельствующие о том, что первый этап

гуморального компонента иммунологической реактивности организма на острое повреждающее воздействие связан с образованием неспецифических антител, второй — с образованием специфических антител [28]. Большая часть исследований, посвященных изучению патогенеза аутоиммунных заболеваний, в скрытом или явном виде содержит попытку связать клинические проявления этого заболевания с серологическими маркерами, главным образом с аутоантителами определенной специфичности. Действительно, с обнаружением аутоантител к двухспиральной ДНК, ядерным рибонуклеопротеидам, некоторым белкам клеточных мембран и матрикса соединительной ткани стала возможной специфическая лабораторная диагностика СКВ [117,175]. Циркулирующие аутоантитела, несомненно, являются ведущими серологическими маркерами аутоиммунных болезней, определение которых имеет иногда решающее диагностическое значение. Наиболее хорошо в настоящее время разработаны вопросы серологической диагностики аутоиммунных ревматических болезней. Доказано, что антитела к двухспиральной ДНК являются не только характерным иммунологическим маркером СКВ, но и уровень антител хорошо коррелирует с активностью патологического процесса при этом заболевании и является неблагоприятным прогностическим признаком [42,118,147]. Высокие титры ревматоидного фактора (РФ) выявляются у 80% пациентов с ревматоидным артритом [83,147,162], а также при синдроме и болезни Шегрена [95], у 32% больных СКВ [147]. Изучение аутоантител позволило подойти к решению одной из наиболее актуальных проблем современной ревматологии — проблемы клинико-иммунологических субтипов болезни [22,182]. Например, антитела к Ro-антигену (анти-Ro) особенно характерны для СКВ в сочетании с синдромом Шегрена, подострой кожной волчанки, причем обнаружение данных аутоантител коррелирует с развитием васкулита [212]. Обнаружение очень высоких титров антител к рибонуклеопротеину фактически позволило выделить в качестве

самостоятельной нозологической формы СЗСТ [95]. Антитела к фосфолипидам являются прогностическим признаком тромботических осложнений не только при СКВ [128], но и определенной группы больных инфарктом миокарда [54,153]. При вторичном антифосфолипидном синдроме в сочетании с СКВ отмечено, что увеличение степени активности заболевания коррелирует с повышением уровня антинуклеарных и снижением уровня антифосфолипидных аутоантител [54,65]. Значительную положительную корреляцию наблюдали между уровнем содержания аутоантител к нуклеосомам и степенью активности, а также выраженности системных проявлений [220]. Однако есть исследования, в которых авторы отрицают связь антинуклеарных аутоантител с активностью СКВ [197]. Известно, что повреждающее действие аутоантител к ds-DNA связано с перекрестной реакцией антител к ДНК с другими молекулами, такими как фосфолипиды или гликозаминогликаны в соединительной ткани и поверхности клеток [100,164,200,205].

Существенное значение уделяется определению антител к форменным элементам крови, образование которых лежит в основе аутоиммунных цитопений [7,80]. Выделены первые серологические маркеры системных васкулитов - антитела к нейтрофилам, которые выявляются в 100% случаев при диффузной болезни соединительной ткани с поражением легких, системного или легочного васкулита и коррелируют с тяжестью и активностью заболевания [67,79]. У больных миастенией в 63,6% случаев обнаруживаются антитела против рецептора для ацетилхолина, уровень которых также коррелирует с тяжестью заболевания [11]. Прослежена связь аутоантител к рецепторам ацетилхолина с длительностью и тяжестью заболевания [209].

Однако признается, что с практической точки зрения принципиально важное значение имеет тот факт, что само по себе обнаружение аутоантител не является достаточным для диагностики определенного аутоиммунного заболевания [17,80,100]. В последние годы сахарный диабет I типа

рассматривается, как аутоиммунное заболевание, опосредованное преимущественно Т-клеточным иммунным ответом против (З-клеток островков поджелудочной железы. Однако новые исследования показали, что в раннем детстве СД I типа может запускаться антителами, тогда как при диабете у взрослых они не существенны и в развитии этой патологии важны генетические факторы и факторы окружающей среды [180].

Аутоантитела к плазминогену были найдены в сыворотках больных системными заболеваниями соединительной ткани, однако, несмотря на ожидания многих исследователей, функциональная активность этих аутоантител и их ценность в качестве прогностического маркера отрицаются большинством исследователей [10,199]. Также показано, что повышенный уровень аутоантител к рецептору тиреотропного гормона является показателем диффузного токсического зоба, но не отражает степень компенсации эндокринной офтальмопатии и не может служить маркером эндокринной офтальмопатии, как считалось раннее [5].

Данные о взаимосвязи титров аутоантител с выраженность патологических изменений, как видно из представленных выше данных, противоречивы: имеются сведения, как о прямой, так и обратной зависимости. Предполагают, что в каждом конкретном случае обнаруживаются только не связанные тканями избыточные органные или тканевые аутоантитела, и поэтому вряд ли титры аутоантител в сыворотках крови могут отражать динамику аутоиммунного процесса [17,89,127]. Некоторые исследователи полагают, что продукция аутоантител отражает состояние, находящееся на грани между нормой и патологией и является лабораторным прогностическим показателем возможности развития при определенных условиях аутоиммунного процесса и такие лица нуждаются в динамическом наблюдении [82]. При оценке клинической и диагностической значимости обнаружения аутоантител необходимо учитывать стойкость и выраженность аутоиммунного ответа.

Таким образом, наличие у больного аутоиммунным заболеванием аутоантител является не только диагностическим критерием, ибо аутоантитела активно вносят свой вклад в развитие патологического процесса и претендуют на роль индикаторов прогноза заболевания [42,61,147]. Доказано, что аутоантитела способны связывать широкий спектр существующих в организме антигенов различной химической природы, а присущая таким аутоантителам кросс-реактивность является одним из важнейших факторов, определяющих масштаб и глубину патогенного потенциала и широту клинико-диагностической значимости аутоантител [64,79,80,200]. Однако вопрос о разграничении нормы и патологии остается открытым по причине малоизученное™ нормального уровня аутоантител. Имеют ли аутоантитела самостоятельное значение в патогенезе аутоиммунных заболеваний или им принадлежит лишь вспомогательная роль, окончательно не выяснено [17,77].

1.2.2 Содержание и роль аутоантител при заболеваниях неаутоиммунной

природы

Выше уже отмечалось, что синтез аутоантител является компонентом нормального иммунного ответа. С помощью современных методов, обладающих очень высокой чувствительностью, аутоантител могут обнаруживаться у клинически здоровых людей, у здоровых родственников больных аутоиммунными заболеваниями [79,82], а также на фоне разнообразных инфекционных процессов [19] и приема лекарственных препаратов [17,23]. В последних случаях уровень аутоантител может значительно превышать норму. Часто аутоантитела образуются к собственным тканевым компонентам, измененным под действием лекарственных веществ и химических агентов [161,177]. Показано, что некоторые лекарственные препараты могут индуцировать продукцию антител к широкому спектру антигенов даже у практически здоровых людей [17,23,53,146]. Среди лекарственных препаратов, способных реагировать с

антигенными структурами клетки, выделяют: антибиотики, сульфаниламиды, антиконвульсивные средства, анальгетики, пипольфен, гормональные препараты (антитиреоидные), противотуберкулезные средства (ПАСК, тубазид), левамизол гепарин, анестетики и т.д. [23,93,146,146]. Антитела вырабатываются против измененных в результате лекарственных препаратов антигенов клеточной поверхности и компонентам ядра. Аутоантитела к тромбоцитам обнаруживают при всех видах цитопений, индуцированных гепарином, антибиотиками, цитостатиками и т.д.[80]. Увеличение частоты регистрации повышенных концентраций антиядерных антител до 50-75% зарегистрировано на фоне приема гидралазина и новокаинамида [80]. Отмечена четкая обратная зависимость высоты титра аутоантител к нейтрофилам и количества нейтрофилов периферической крови - титр аутоантител наибольший в период агранулоцитоза, но и после выхода из агранулоцитоза антитела выявляются в высоком титре [23]. Исследователи считают, что процесс деструкции не заканчивается сразу после прекращения антигенной стимуляции и может продолжаться длительное время. Отмечают, что аутоантитела, продолжающие циркулировать в крови после выхода из агранулоцитоза, не вызывают разрушения нейтрофилов. Мнение Л.Йегера о влиянии некоторых препаратов для наркоза на функцию иммунокомпетентных клеток, подтверждается рядом исследований [44,58,93,112]. Установлено, что общие и местные анестетики, подавляют фагоцитарную активность лейкоцитов и вызывают депрессию клеточного иммунитета [93]. Однако, протективное влияние анестезии на операционный стресс уменьшает иммуносупрессивный эффект операции [44]. Присутствие большого количества антигенов на тромбоците обусловило их значимость в трансфузиологии и акушерстве [25]. Причиной аутоиммунных форм тромбоцитопений является выработка аутоантител против собственных тромбоцитарных антигенов, неизмененных или измененных в результате воздействия лекарств, вирусов или агентов [7,19]. Лимфоцитотоксические аутоантитела обнаруживаются при гемотрансфузиях, у больных с

пересаженной почкой, которым проводились многочисленные гемотрансфузии, причем присутствие антител коррелирует с отторжением трансплантата. Предполагается участие аутоантител в развитии спонтанных абортов [80].

Многими авторами признается, что изучать роль аутоантител в норме достаточно сложно. Кроме того, как указывалось выше, увеличение их количества часто не проявляется на физиологическом уровне, поэтому существенный интерес могут представить данные об изменениях уровней аутоантител при различных патологических состояниях, не относящихся к аутоиммунным, в патогенезе которых участвуют антигенные мишени этих аутоантител. [77,189,194]. Так, у больных диабетом и людей группы риска увеличено содержание антител к инсулину, у этих же людей параллельно наблюдается и увеличение аутоантител к клеткам поджелудочной железы [171].

В развитии аутоиммунного ответа обсуждается роль инфекции, аллергии и
воспаления [75,189,194]. Полагают, что инфекционные агенты могут
стимулировать процесс антителообразования и появления

тканевоспецифических и/или перекрестнореагирующих антител [19,94,189]. Каманин Е.И. и Панова Н.В. исследовали содержание аутоантител в сыворотках крови больных хроническим фарингитом [60]. Аутоантитела к глоточному антигену обнаружены в крови в 86,2%, ЦИК в 10,3%. Появление аутоантител рассматривается как нормальная реакция организма на поступление тканевого антигена поврежденного органа, т.е. свидетельствует о деструкции ткани [60]. Полагают, что причиной аутоиммунных заболеваний может быть молекулярная мимикрия микробных и вирусных патогенов, приводящая к перекрестным реакциям образующихся против них антител, которые играют роль пускового механизма [19,206,164]. Некоторые авторы считают, что аутоиммунные реакции можно использовать в качестве одного из критериев в комплексной диагностике воспалительных процессов [33]. Так, повышение частоты обнаружения антител к нативной и двухспиральной ДНК,

трипсину при остром панкреатите связывают с активностью воспалительного процесса в поджелудочной железе, а повышение антител к антигенам поджелудочной железы, чаще определяемые при обострении хронического панкреатита, характеризуют процесс хронизации заболевания [102]. Отмечена выработка антитромбоцитарных антител через 4-8 недель после начала инфекционного заболевания у детей, причем у 15% заболевание переходит в хроническую форму [219]. Выдвинута гипотеза, согласно которой хронический воспалительный процесс может перейти в аутоиммунную патологию в результате нарушения регуляторных процессов в активированных на периферии моноцитарно-макрофагальных клеток с провоспалительными свойствами, которые неспецифическими путями поступают в органы-мишени [111,136]. Не исключают, что эти процессы в наибольшей степени выражены у индивидов с генетической предрасположенностью к аутоиммунной патологии [210]. При этом выявлена четкая разница относительно концентраций аутоантител в связи с длительностью воспалительного процесса и агрессивностью возбудителя. Установлено, что влияние аутоантител определяется, в первую очередь, их излишней концентрацией [39]. Многими авторами отмечается факт, что при вирусной и бактериальной инфекции закономерно выявляются аутоантитела, однако в настоящее время остается неясной их роль в патогенезе инфекционных заболеваний [36,37,70].

В сыворотках людей с болезнями печени (цирроз, гепатит) повышен уровень антител к нативному и полимеризованному человеческому сывороточному альбумину [77,202], в 40-50% случаев определяются антиядерные аутоантител [163], по некоторым данным при первичном билиарном циррозе у 95-100% больных выявляются антинуклеарные антитела [71,157]. Однако корреляции между уровнем антиядерных антител и клиническими, биологическими и гистологическими стадиями развития болезни не обнаружено. Считают, что большинство разновидностей данных

аутоантител являются скорее вторичным феноменом по отношению к деструкции ткани [191,211].

Полагают, что при первичном билиарном циррозе важную роль играют антимитохондриальные аутоантитела, которые выявляются за годы до клинического проявления заболевания и могут явиться его прогностическими признаками [15]. Определение антител к гладкой мускулатуре и особенно митохонриальных антител позволяет проводить дифференциальную диагностику хронических заболеваний печени [81].

Установлено, что аутоиммунные сдвиги имеют основное значение в патогенезе миокардитов, постинфарктного синдрома, атеросклероза, [2,38,39,54,198]. Проведен анализ содержания антител к брадикикину в сыворотках доноров и больных с ишемической болезнью сердца, гипертонической болезнью и гиперлипидемией [57]. Установлено, что содержание антител при патологических состояниях отличается от нормального уровня, наиболее резкие колебания в содержании антител к данному биорегулятору отмечены для групп пациентов с гипертонией. По данным Л.К.Добродеевой и О.А.Миролюбовой частота аутосенсибилизации у больных ИБС составляет 68,18±9,93%. У этих больных выявлены аутоантитела и антителозависимый цитолиз. Частота регистрации повышенного содержания антител к кардиолипину составила 66,67%, выявлена корреляционная связь аутоантител с апоптозом, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, вторичный Т-клеточный иммунодефицит. В 86,67% определялись аутоантитела к тромбоцитам, к ДНК. Установлено, что преморбитный фон для развития сосудистых заболеваний характеризуется формированием механизма антиген-специфической клеточной цитотоксичности, появлением антител к кардиолипину с прокоагулянтной активностью и антител к ДНК, повышенным содержанием индукторов апоптоза и ЦИК у жителей европейского Севера в возрасте 40-60 лет [54]. Исследования, проведенные Bruca I. с соавт. в Палермо, не выявили

статистически достоверной разницы титров антиядерных антител в сыворотке крови у больных с ИБС и у здоровых людей [139].

Предполагается повышение частоты регистрации аутоантител к ДНК с нарастанием уровня концентрации IgE при атопических заболеваниях [113]. Выявлено, что в механизме формирования хронической рецидивирующей крапивницы, помимо аутоантител к IgE или его рецептору, могут участвовать аутоантитела к антигенам щитовидной железы [9,152].

Изучается роль аутоиммунных реакций в патогенезе паразитарных инфекций [217]. Классическими примерами таких реакций является анемия, спленомегалия и гломерулонефрит при малярии, продукция антител против нервных клеток, эндокарда, поперечно-полосатой мускулатуры при трипаносомах. Такие паразитарные болезни как амебиаз, шистосомоз, филяриоз, анкилостомоз, тениоз, аскаридоз, лямблиоз, эхинококкоз и токсокакоз протекают под масками ревматических болезней. При этом выявляются антинуклеарные антитела, антитела к цитоплазме нейтрофилов, антитела к тубулину, дефенсину и т.д. В развитии аутоиммунных заболеваний при этом, могут играть роль некоторые цитокины и белки теплового шока [217].

Обсуждается аутоиммунная природа паранеопластических синдромов и роль аутоантител в развитии поражения нервной системы [6]. Антитела не являются опухолевыми продуктами, их нельзя назвать онкомаркерами. Вместе с тем выявление у больных с неврологическими нарушениями антинейрональных антител помогает установить причину развития неврологических нарушений или подтвердить паранеоластическую природу неврологического нарушения у онкологического больного. У больных со злокачественными новообразованиями в 10-20% случаев выявляются антинуклеарные антитела [71,157]. Паранеопластические антитела относительно редко встречаются при обследовании даже больших контингентов больных с опухолями, например, только в 2,5% случаев из более, чем 200 больных с мелкоклеточной карциномой легких, раке, при

27 котором паранеопластические синдромы встречаются с наибольшей частотой

[6]. При опухолях щитовидной железы в сыворотках некоторых больных наблюдали повышенный уровень антитиреоглобулиновых антител [150]. Предполагают, что аутосенсибилизация связана с усиливающимся апоптозом Т-лимфоцитов в процессе опухолевого роста [84]. Е.Н.Кологривова с соавт (2000) исследовали концентрации аутоантител у больных со злокачественными опухолями полости рта, легкого, желудка и больных с аутоиммунными заболеваниями [13]. Установлено, что при злокачественных новообразованиях регистрируются полиморфные аутоиммунные реакции в отношении различных тканевых антигенов, включая онкопротеины [13,141,178]. Интенсивность наработки аутоантител у больных с опухолевыми процессами авторы сопоставляют с интенсивностью антителопродукции у больных с аутоиммунными заболеваниями. Представляет интерес исследования, проведенные в США в 1999 году, которые выявили реактивность сывороток больных раком легкого с ядерными экстрактами опухолевых клеток [125]. Некоторые из таких аутоантител в сыворотке больных связаны с длительностью выживанием больных и подавлением развития болезни.

Таким образом, вопрос о роли аутоиммунных реакций в патогенезе опухолевых заболеваний находится на стадии накопления фактов и полностью не раскрыт.

Обнаруживаемые ранее в сыворотке здоровых людей и некоторых животных аутоантитела, взаимодействующие с эпителиальными клетками, были выявлены в повышенных концентрациях при ожогах. В норме они лишены видовой специфичности, однако при патологии прирост их содержания может осуществляться за счет появления видоспецифических аутоантител, что свидетельствует об их гетерогенности [74].

Установлено, что вид и длительность наркоза, стресс от опрерациолнного вмешательства, объем тканевой травмы и операционная кровопотеря оказывают иммуносупрессивное действие, которое

осуществляется как за счет прямого воздействия, так и опосредованного, через систему нейрогуморальной регуляции [93,112]. Снижение содержания лимфоцитов и нейтрофилов в крови достигают максимума через 10-12 часов после операции, угнетение поликлональной активации лимфоцитов на митогены регистрируются уже через два часа после хирургической травмы. Нормализация, или тенденция к нормализации показателей Т- и В-лимфоцитов, показателей фагоцитоза у больных, оперированных по поводу ЖКБ, наблюдается с 3-7 дня после операции [112]. После операции АКШ выявляются антитела к ds-DNA в концентрациях выше допустимых -58,33±5,56 МЕ/мл (при норме до 50 МЕ/мл), у 50% больных концентрация аутоантител превышала принятую норму [54]. Авторы считают, что появление антител к ds-DNA отражает повышенный апоптоз у послеоперационных больных. Повышение аутоантител на фоне снижения IgG и М отмечено в раннем послеоперационном периоде после типичной не осложнённой холецистэктомии. Более значительное повышение содержания аутоантител выявлено при наличии инфекционных осложнений [94,112].

Данные о взаимосвязи титров аутоантител с выраженность патологических изменений противоречивы: имеются сведения, как о прямой, так и обратной зависимости, что было показано выше. Кроме того, динамическое исследование уровней антител к основному белку миелина и к ДНК в крови больных рассеянным склерозом выявило достоверное уменьшение уровня аутоантител к ДНК за месяц до обострения, повышение уровня аутоантител к основному белку миелина при обострении, который достигает максимума при выходе из него [32].

Существует мнение, что аутоантитела не только запускают иммунные реакции, приводящие к патологическим процессам, но и способны участвовать в восстановлении пораженных тканей [31]. Естественный аутоиммунитет важен для поддержания нормального функционирования различных тканей организма. Участие аутоиммунных Т-лимфоцитов в сохранении целостности ткани продемонстрировано M.Schwarts на модели

защиты центральной нервной системы от последствий аксонной травмы, вызванной вторичной дегенерацией [204].

Таким образом, уже давно обнаружено, что аутоантитела регистрируются при многих заболеваниях. Имеется достаточное количество литературных данных, доказывающих несомненное участие аутосенсибилизации в патогенезе не только аутоиммунных, но и онкологических, инфекционных, атопических заболеваниях. Однако, несмотря на многочисленные исследования, однозначно признается, что физиологическая роль аутоантител, участие их в развитии патологических процессов до сих пор остаются неясными [63,82,119,150].

1.3 Факторы, влияющие на содержание аутоантител

1.3.1 Содержание аутоантител в зависимости от пола и физиологического

состояния организма

В организме всегда есть клетки, вырабатывающие антитела [26,34]. Известно, что уровень содержания аутоантител может колебаться в широких пределах и зависеть от физиологических состояний организма. Показано увеличение содержания аутоантител при стрессе, физических нагрузках, перегрузках [50,106,107], в период полового созревания, беременности, климаксе [12,34,37,61,68]. В литературе имеются единичные сведения, что в различные периоды онтогенеза в сыворотке крови у здоровых людей наблюдается повышение уровня содержания аутоантител в раннем возрасте от 1 до 10 лет [51,176]. Ряд авторов отмечается повышение уровня аутоантител к собственным антигенам у женщин при беременности, в послеродовом периоде и у их новорожденных детей, а также детей грудного возраста [51,176]. Недавние исследования, проведенные в Казанском университете, выявили достоверное повышение уровня содержания аутоантител к РНК в сыворотках крови женщин на сроке беременности 20-40 недель (1,55±0,13отн.ед.), рожениц, резус изоиммунизированных (1,60±0,12отн ед.), а также повышение аутоантител к двухспиральной ДНК в сыворотке крови новорожденных детей

(2,28±0,96 и 1,66±0,17отн.ед.), по сравнению с группой здоровых взрослых доноров [12].

Обследование в возрастной динамике 1240 детей, родившихся и постоянно живущих на Севере, выявило возрастную динамику повышенных уровней аутоантител [37,38]. Постепенное (с возрастом) накопление высоких, больше чем в норме, аутогемагглютининов и лейкоагглютининов 3,48±0,11% касается младшей возрастной группы (5-6 лет), 5,62±0,13% детей 10-12 лет и выше у подростков (10-14 лет) 17,57±0,18% (р<0,01) [39]. Показанная динамика дает четкое представление об активизации аутосенсибилизации в подростковом периоде.

В нескольких популяционных исследованиях было показано, что в старших возрастных группах повышается число случаев выявления наиболее распространенных аутоантител (антител к тиреоглобулину и антигену париетальных клеток, антинуклеарных антител) [56,72,165]. Причем наибольшее содержание аутоантител отмечалось у пожилых людей старше 60 лет и уменьшалось на седьмой декаде жизни, что объясняли более высокой смертность тех, у кого содержание аутоантител было повышено [165]. В возрасте до 60 лет отмечалось повышение частоты антинуклеарных аутоантител в группе носителей аутоантител к тканям щитовидной железы и желудка. Зависимость частоты появления аутоантител от возраста объясняют результатом эндогенных возрастных изменений иммунной системы и/или результатом кумуляции влияния вредных факторов внешней среды на протяжении жизни [56,69]. Существуют ряд гипотез о том, что начало старения связано с иммунной недостаточностью [69], которая предполагает, что старение является последствием каскада событий, начавшихся с инволюции тимуса [130]. Другие исследователи полагают, что у пожилых людей нарушается механизм апоптоза лимфоцитов, в результате этого активированные лимфоциты и клетки памяти не уничтожаются, тогда как заселение иммунной системы недифференцированными лимфоцитами блокируется [216]. R.Attanasio с соавт. на модели у здоровых бабуинов в

возрасте, соответствующем половине жизненного цикла данных животных, показали, что продукция антиядерных антител, антиклеточных антител и естественных аутоантител постепенно и значительно возрастает с возрастом, без увеличения концентрации сывороточных иммуноглобулинов или уровней избирательных маркеров иммунной дисрегуляции, т.е. в отсутствие распознаваемых патологических состояний стареющей иммунной системы [119]. По данным А.А. Зайнуллина с соавторами, при исследовании аутоантител к нуклеиновым кислотам в возрастной группе 16-60 лет, не обнаружено различий от генеральной совокупности ни в одной возрастной группе. Установлено также, что резус принадлежность и различия в группах крови не влияют на уровень содержания аутоантител к нуклеиновым кислотам в сыворотке крови здоровых людей [12].

Большая часть аутоиммунных заболеваний поражает женщин: соотношение 2:1 для рассеянного склероза, 3:1 для ревматоидного артрита и 9:1 для системной красной волчанки. К иммунологическим причинам, приводящим к такой диспропорции, относят субпопуляции Т-хелперов ТН1 и ТН2, уровень гуморального ответа на антигены, половые гормоны, гормоны желез внутренней секреции, беременность, генетические факторы, сцепленные с ГКГС [218]. Так показано, что частота обнаружения антиядерных антител (АЯА) у здоровых людей зависит от пола и возраста. У лиц моложе 40 лет АЯА выявляются в 1-3% случаев, а у лиц старше 60 лет — в 16-25% случаев. У женщин АЯА выявляются в среднем в 5 раз чаще, чем у мужчин. Частота выявления АЯА также существенно повышается у родственников больных аутоиммунными заболеваниями - 9-57% [80]. Однако, исследования содержания аутоантител к основному белку миелина, аутоантител к РНК, тромбоцитам, ряду органоспецифических атоантител не выявили половых различий [148,170,218].

Антинуклеарные аутоантитела во всех возрастных группах чаще встречаются у курящих мужчин, чем у бросивших курить, а у бывших курильщиков чаще, чем у тех, кто никогда не курил [56].

32 В зарубежной литературе практически нет данных об уровнях

содержания аутоантител в сыворотках здоровых людей в популяции. В отечественной литературе представлены данные А.А.Зайнуллина с соавт., исследовавших пороговые уровни содержания аутоантител к нуклеиновым кислотам в сыворотке крови здоровых доноров Татарстана. Уровень содержания аутоантител к ДНК находится в пределах 0,53-2,20отн.ед_м средний уровень составляет 1,00±0,02отн.ед., среднее содержание аутоантител к РНК составляет 0,95±0,01отн.ед. При этом у 35% здоровых доноров обнаружен высокий уровень содержания аутоантител к нативной ДНК, у 42% к двухспиральной ДНК и у 14% - аутоантитела к РНК [12]. Содержание аутоантител к двухспиральной ДНК у здоровых доноров, по данным О.Н.Панченко с соавторами, по IgM составляет — 0,69±0,07отн.ед., по IgG -0,85±0,06отн.ед [88]. Частота положительных реакций, выявляющих антитела к двухспиральной ДНК у здоровых мужчин в возрасте 41-60лет, жителей г.Архангельска, составила 26,44±4,76%, аутоантител к кардиолипину-17,05±4,01%, которые сопровождались повышенными концентрациями ЦИК (8,96%), TNF-a (26,14%), IL-2 (31,32%) [54]. В.Б.Гервазиева с соавт. исследовали содержание IgG-антител к основному белку миелина (ОБМ) в 450 сыворотках здоровых людей от 6 месяцев до 70 лет. Антитела выявлены в 64% сывороток, средний уровень при этом составил 23,3±7,5мкг/мл и не превышал нормативных содержаний. При анализе возрастной динамики была выявлена тенденция к повышению уровня аутоантител с возрастом, что позволило выделить две возрастные группы с достоверно различающимся содержанием IgG-антитела к ОБМ. В первой группе (лица от 5 месяцев до Плет) уровень аутоантител составил 16,7±1,5мкг/мл, во второй группе (от 12 до 70 лет) - 29,9±3,0мкг/мл [24].

Полагают, что совокупность конститутивно экспрессируемых аутоантител сыворотки крови, продуцируемых иммунной системой здорового человека, отражает индивидуальную молекулярную аутентичность организма [91]. Подчеркивается, что в условиях физиологической нормы осуществляется

постоянная продукция естественных аутоантител к огромному числу внеклеточных, мембранных, внутриклеточных и внутриядерных антигенов, причем уровни синтеза и секреции таких антител отличаются очень небольшими индивидуальными вариациями и мало зависят от пола и возраста здорового человека [64,91].

Таким образом, данные по содержанию аутоантител в зависимости от возраста и пола немногочисленны и носят противоречивый характер.

1.3.2 Вляние факторов внешней среды на содержание аутоантител Влияние неблагоприятных климатических факторов на увеличение концентраций и многообразия продуктов тканевого обмена со свойствами аутоантигенов широко известно [2,4,18,87]. К таким факторам относятся охлаждение, резкая фотопериодика и напряженный иономагнитный режим. Считают, что сенсибилизация и аутосенсибилизация являются непременным следствием завершения любого адаптационного процесса [98,103,105].

Воздействие низких температур, в том числе и местное, способствует повышению содержания аутоантигенов и, соответственно, аутоантител. Установлено, что изменения в соотношениях содержания в периферической крови Т- и В- лимфоцитов, тенденция к лейкопении, особенно на ранних этапах адаптационного процесса, определяют более широкие возможности для аутосенсибилизации у жителей Севера [55,87]. Имеются данные, показывающие, что при охлаждении развивается поражение коллагенового комплекса соединительной ткани и аутоиммунизация организма продуктами его распада [30,108]. Об этом свидетельствует высокая частота выявления аномально высоких концентраций аутогемагглютининов, аутоантител к тканям кожи, почек, сердца и других органов (11-70%) [36,108]. Аутоантитела к миоглобину, тиреоглобулину, фосфорилированному полипептиду, ядерным антигенам негистоновой и гистоновой природы, гистидил-транспортной РНК-синтетазе и топоизомеразе-1 в концентрациях, превышающих контрольный физиологический предел, выявлены в 11-23%

случаев при средних концентрациях 2,65±0,73 ед/мл [37,39,40]. Средний возраст одновременного выявления повышенных концентраций аутоантител, РЭА и дефицита фагоцитарной активности, как признаков старения, составляет на Севере 42,3±4Д года [39]. О более раннем постарении свидетельствуют высокая частота регистрации дефицита тестостерона в крови у мужчин до 50 лет (46,8±2,3%) и очень ранние сроки наступления менопаузы у женщин - 43,8±2,6 лет [39,110].

По данным И.М.Шубика и С.В.Петленко у жителей Мурманской
области аутоантитела обнаруживаются в 30-40% случаев, хотя встречаются в
невысоких концентрациях. Частота выявления антител примерно в 2,5-3 раза
выше, чем в Санкт-Петербурге, где они были найдены в крови у 13%
обследованных лиц. Возможной причиной повышенного образования
аутоантител считают снижение содержания в крови Т-лимфоцитов при
нормальном (в большинстве случаев), а иногда и повышенном количестве В-
лимфоцитов. Проведены также исследования, подтверждающие повышение
частоты обнаружения противотканевых термостабильных

комплементсвязывающих аутоантител на Кольском полуострове и на Чукотке у людей разных этнических групп. Титры антител примерно в 4-10 раз превышали титры, выявленные у жителей Санкт-Петербурга [53,108].

По данным Л.К.Добродеевой аутоантитела к ДНК, РНК и тиреоглобулину выявляются у жителей Заполярья у 31-32% обследуемых, а аутогемагглютинины, лейкоагглютинины и лимфоцитотоксины обнаруживаются не только часто, но и довольно высоких титрах (1/80 и более) [38,39]. Предполагают, что умеренное повышение продукции противотканевых антител связано с образованием так называемых нормальных аутоантител, нейтрализующих токсические продукты обмена веществ, усиленного в условиях Заполярья. Однако, избыточное образование такого рода антител может превратить их из защитных аутоантител в аутоантитела-аутоагрессоры, способствующие переходу патологического процесса в хроническое течение [30,39,41,108].

Известно, что особенности иммунологической реактивности могут быть сходными при неблагоприятных для человека климатических параметрах. Активизация аутоиммунных процессов не является специфической для высоких широт и может наблюдаться при солнечно-тепловых перегревах. Более значительный уровень антиэритроцитарных аутоантител и лейкоагглютининов отмечается у жителей Средней Азии (34-46%) [73,40] и в условиях влажных тропиков прибрежной Гвинеи [47]. Данные литературы свидетельствуют также о повышении содержания аутоантител у людей, проживающих в дискомфортных климатических условиях высокогорья [108]. Многообразие факторов высокогорья на организм: повышенная УФО-радиация, холод, гипоксическая гипоксия обуславливают повышение содержания органоспецифических аутоантител, аутогемагглютининов 11-39% случаев.

Исследования, проведенные в Аральском регионе, показали, что на фоне высокой температуры и сухости воздуха, в период бурь в воздух поднимаются тонны пыли, насыщенной морской солью и токсическими соединениями (ДДТ, хлор- и фторсодержащие ядохимикаты, диоксин и т.д.), которые помимо прямого действия на слизистые оболочки дыхательных путей, вызывает постоянное антигенное раздражение иммунной системы, сенсибилизируя организм, значительно снижая его резистентность к воздействию других экстремальных ксенобиотических факторов [53].

Считают, что соли ксенобиотических металлов: ртуть и серебро также способны освобождать скрытые собственные пептиды, вызывающие выработку разных антиядерных аутоантител [188]. Среди жителей городов с крупным газоперерабатывающим производством на фоне наиболее частой распространенности дефицита Т-лимфоцитов и сывороточного IgA выделяется аутосенсибилизирующий компонент в форме многообразия аутоантител, высокой частоте их регистрации [41]. Установлено, что признаки аутосенсибилизации и аллергии в форме более высокой частоты обнаружения повышенных концентраций аутоантител являются проявлениями

непосредственного влияния на организм человека отходов деятельности ЦБК [37,38,48].

Иммунокомпетентные клетки наиболее чувствительны к действию радиации и в течение длительного периода несут на себе признаки ее влияния [86].

Иммунологическая реактивность в условиях возможного воздействия ионизирующего облучения изучена в Санкт-Петербургском Научно-Исследовательском институте радиационной гигиены под руководством В.М.Шубика и изложена в полном объеме в книге «Ядерные взрывы на Новой Земле» [109]. Результаты обследования испытателей северного полигона выявили высокие титры аутоантител, их широкое разнообразие, при этом степень аутосенсибилизации была значительно выше среди тех, кто работал до 1963 г., т.е. в период проведения испытаний в атмосфере [29,62]. Данные 25 летнего иммунологического мониторинга жителей Архангельской области и НАО, проведенные профессором Л.К.Добродеевой, подтвердили названные выше закономерности, также получены данные о дефиците фагоцитарной защиты, содержании IgA, естественных киллеров, функционально активных Т-лимфоцитов на фоне повышенных концентраций IgE, РЭА и аутоантител.

Изучая состояния иммунной системы у участников ликвидации последствий (ЛПА) аварии на ЧАЭС, имевших контакт с небольшими дозами ионизирующего излучения, ряд авторов наблюдали снижение общего количества Т-лимфоцитов и угнетение поглотительной способности нейтрофилов. При этом уровень содержания аутоантител к нативной и двухспиральной ДНК не превышал физиологической нормы, появление повышенных концентраций аутоантител к односпиральной ДНК наблюдали при дозе более 50 бэр [97,99,101]. По данным С.С.Корытько и соавт у участников ЛПА через 10-12 лет определяется повышение аутоантител к тимическому антигену на фоне снижения уровней сывороточного тимулина и функциональной активности Т-лимфоцитов в ответ на митогены (ФГА) [52]. Исследования, проведенные Т.В.Воронцовой у детей, проживающих на

37 контаминированных радионуклеотидами территориях Гомельской области,

установили, что у детей регистрируется повышенная частота выявления позитивных тиреоидных аутоантител, которая не сопровождается нарушением функции щитовидной железы. Пубертатный возраст у девочек данных районов является фактором риска для развития аутоиммунных заболеваний, особенно гипотиреоза, у лиц, подвергшихся воздействию радиации вследствие аварии на ЧАЭС [21].

Известно, что Ненецкий автономный округ является неблагоприятным не только с позиций жесткости климатических условий, но и с учетом реальности последствий ядерных испытаний на полигоне Новая Земля. Установлено, что одной из особенностей иммунного статуса жителей Ненецкого автономного округа является высокий уровень аутосенсибилизации [38,108]. Среди жителей территорий округа очень часто выявляются повышенные концентрации аутоантител к тиреоглобулину (48,21± 1,63%), двухцепочечной ДНК (52,63±1,74%) и рибонуклеопротеину (11,25±2,84%)[73,75]. По данным В.М.Шубика, противотканевые комплементсвязывающие антитела к антигенам сердца, печени, почек и легких у ненцев и русских в НАО обнаруживались в 70-90% случаев, титры антител нередко были повышены в 9-15 раз по сравнению с аналогичными показателями в умеренных широтах [53,108].

Влияние климатогеографических факторов на

аутосенсибилизацию наиболее резко проявляется зимой и в летний период. В зависимости от характера и типа аутоантител зимой частота их обнаружения и среднее содержание в сыворотке зарегистрировано в 3-5 раз выше, чем в летние месяцы [34]. Исследования, проведенные Л.К.Добродеевой, выявили, что в период полярной ночи заметно подавлены практически все иммунные реакции и четко увеличена частота регистрации повышенных концентраций лейкоагглютининов (с 4,41 до 29,41%), аутогемагглютининов (с 2,35 до 20,23%), аутоантител к тиреоглобулину (с 16,67 до 45,68%), комплексному антигену щитовидной железы (с 3,25 до 9,43%), печени (с 2,27 до 11,25%). С

наступлением полярного дня, напротив, наблюдается резко выраженная активизация иммунных механизмов, включающая повышение активности фагоцитоза, пролиферация в системе моноцитов с .увеличением в составе моноцитограммы промоноцитов, повышение содержания в крови Т-клеток с рецептором к IL-2, пролиферативных процессов с участием IL-2, антигенов HLA DR, естественных киллеров и антителообразования [36,37]. Причиной аутоиммунных реакций в климатических условиях Севера считают развитие микродеструктивных процессов [108], катаболитческий эффект повышенной активности глюкокортикоидов [16], а также более высокое содержание в крови у жителей Севера и в условиях воздействия низких температур свободных жирных кислот, гистамина и гепарина [34,36,53].

В магнитовозмущенные дни у жителей Архангельской области, имеющих высокий уровень магниточувствительности. происходит достоверное повышение содержания аутоантител в сравнении с магнитостойкими днями [38,39].

По мнению Л.К. Добродеевой повышение концентраций аутоантител, в неблагопрятных климатоэкологических условиях имеет биологический смысл. Данная реакция относится к защитным физиологическим механизмам, и лишь отсутствие превышения физиологических границ реактивных изменений делает ее рациональной. Расширение предела физиологического отклонения делает грань между физиологической реакцией и патологией хрупкой, прозрачной, увеличивая риск для лиц, менее приспособленных к дискомфортным условиям. Только индивиды с нейтральными в пределах физиологических границ изменениями способны сохранить баланс и здоровье [37,98].

39 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в отделе экологической иммунологии Института физиологии природных адаптации УрО РАН (директор института, д.м.н.,

проф. |А.В.Ткачев]).

В настоящей работе представлены результаты исследования иммунного гомеостаза 708 человек в возрасте от 15 до 80 лет, проживающих в г. Архангельске и Архангельской области. Использованы материалы иммунологического обследования, проведенные на базе отдела экологической иммунологии Института физиологии УроРАН (зав. лабораторией - д.м.н., профессор Л.К. Добродеева).

2.1. Общая характеристика обследованных лиц

Исследовали 158 практически здоровых человека, проживающие в Архангельской области (студенты АГТУ, рабочие, занятые на основных профессиях в лесопильных цехах СЛДК№2 г.Архангельска, ЛДК г. Коряжмы, работники Архангельской городской санитарно-эпидемиологической службы, пенсионеры Архангельского морского пароходства).

В группу практически здоровых отбирались лица, у которых в результате клинического обследования не было выявлено никаких хронических или рецидивирующих заболеваний, частота ОРЗ составляла не более 1-2-х раз в году. В момент обследования и за 2 недели до обследования у всех отобранных лиц никаких отклонений в функционировании органов выявлено не было. В объем обследования, кроме осмотра специалистом, входило тщательное изучение анамнеза, всей предшествующей документации, а также общепринятые клинико-лабораторные исследования.

Средний возраст практически здоровых лиц составляет 47,57±1,22 лет (от 20 до 75 лет), из них 95 женщин (63,29%) и 63 мужчины (39,87%).

С целью определения возрастных особенностей содержания аутоантител обследуемые практически здоровые лица разделены на две возрастные

группы: 20-49 лет (75 человек) и 50-70 лет (83 человека). По возрасту данные группы отличаются достоверно (р<0,001).

Таблица 1 Характеристика практически здоровых лиц по полу и возрасту, п=158


Возрастные группы	практически здоровые		женщины		мужчины
Возрастные группы
абс.	%	абс.	%	абс.	%
20-49 лет	75	47,46	39	52,00	36	48,00
50 75 лет	83	52,53	56	63,47	27	32,53
Всего	158	100	95	63,29	63	39,87

Анализ влияния фотопериодичности на динамику содержания аутоантител проводился по трем периодам: в период биологических сумерек до (ноябрь) и после (февраль) периода биологической тьмы, а также в период восстановления естественной солнечной радиации - в мае.

Таблица 2 Исходные характеристики практически здоровых в анализируемые периоды


	ноябрь		февраль		май

абс.	%	абс.	%	абс.	%
Всего	78	100	54	100	15	100
женщины	51	65,38	38	70,37	7	46,67
мужчины	27	34,61	16	29,63	8	53,34
Средний возраст	40,33±1,58		52,81±1,40		46,33±3,21

Группы практически здоровых, обследуемые в различные периоды года сопоставимы по возрасту. При сравнении доли участия женщин в анализируемых группах, выявлено, что в группе, сформированной в ноябре и феврале, женщин больше, чем мужчин (р<0,001). Однако при сравнении доли участия женщин между исследуемыми группами, достоверных различий не

ГОСУДАРСТВЕННАЯ
41 БИБЛИОТЕКА

выявлено (р>0,05). Процент мужчин в каждой из групп также достоверно не отличается (р>0,05).

С целью изучения характера изменений иммунной системы при аномально высоких концентрациях аутоантител, обследуемые практически здоровые лица разделены на две группы по уровню содержания двухспиральной ДНК, как наиболее полно изученного семейства природных аутоантител, обладающих выраженным патогенным потенциалом:

1 группа - практически здоровые с аномально высокими уровнями
аутоантител к двухспиральной ДНК (выше 50МЕ/мл).

2 группа - практически здоровые с уровнем аутоантител к двухспиральной
ДНК, не превышающими уровень допустимой физиологической границы (до
50МЕ/мл).

В первую группу вошли 33 практически здоровых от 20 до 75 лет, из них 22 женщин (66,67%) и 11 мужчин (33,33%), средний возраст составил 57,21±2,18 лет. Вторую группу составили 79 исследуемых, из них 48 женщин (60,76%) и 31 мужчина (39,24%). Средний возраст практически здоровых данной группы составляет 49,94±1,59 лет. Возрастных различий между группами не выявлено (р>0,05). В обеих группах больше женщин (р<0,01), однако сравнение по половому составу между группами достоверных различий не выявило (Х2⁼О,35, р>0,05).

В группу сравнения включены 560 пациентов, обследованных в медицинской компании «Биокор» (директор - д.м.н., профессор, Л.К.Добродеева). В группу больных с хирургической патологией вошли больные в 1-3 сутки после операций, проведенных в хирургическом отделении больницы им.Н.А.Семашко. Диагнозы у всех больных критериально верифицированы. Все обследования выполнены в стадию ремиссии. Исследования проведены в период с 1999г. по 2004 г.

Средний возраст обследуемых больных составляет 41,47±0,63 года (от 16 до 80 лет), из них 384 женщины (68,57%) и 176 мужчин (31,43%). Средний

возраст и половой состав больных и практически здоровых достоверно не отличаются (р>0,05).

С целью определения возрастных особенностей содержания аутоантител, среди обследованных выделены 473 больных в возрасте 20-75 лет (336 женщин и 137 мужчин), которые разделены на две возрастные подгруппы: 20-49 лет - 335 человека и 50-80 лет - 138 человек.

Таблица 3 Характеристика обследуемых больных в возрастных группах, п=473


Возрастные группы	Больные вне зависимости от патологии		женщины		мужчины
Возрастные группы
абс.	%	абс.	%	абс.	%
20-49 лет	335	70,82	241	71,94	94	28,06
50-75 лет	138	29,17	95	68,84	43	31,16
Всего	473	100	336	71,01	137	28,96

Различие по возрасту в данных анализируемых группах достоверно (р<0,001), соотношение мужчин и женщин — аналогично сравниваемым группам практически здоровых (р>0,05).

Для анализа характера изменений иммунной системы при аномальных концентрациях аутоантител, больные вне зависимости от патологии разделены на три группы по уровню содержания аутоантител:

1 группа - 71 больных, у которых уровень концентрации аутоантител к
двухспиральной ДНК и аутоантител к нуклеопротеидам не превышают
уровень физиологического предела (50МЕ/мл и 1,0МЕ/мл соответственно),
средний возраст 44,06±1,54 лет.

2 группа — 171 больных, с аномально высокими концентрациями
аутоантител к двухспиральной ДНК (концентрации аутоантител к ds-DNA
больше 50 МЕ/мл, аутоантител к нуклеопротеидам не превышают уровень
1,0МЕ/мл), средний возраст 43,21±1,23 лет.

3 группа - 119 больных с аномально высокими концентрациями аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам (выше 50МЕ/мл и 1,0 МЕ/мл соответственно), средний возраст 41,97± 1,67 лет. Группы сопоставимы по возрасту и полу (р>0,05).

С целью изучения содержания аутоантител при отдельных патологических состояниях, все обследованные больные разделены соответственно манифестным формам приобретенного иммунодефицита на группы. По возрасту и полу группы были сопоставимы.

Таблица 4 Структура обследованных больных по патологии, п=550


Патологические состояния	Количество больных
Патологические состояния
абс.	%
Аутоиммунная патология	160	29,09
Аллергические заболевания	85	15,45
Хроническая бактериальная инфекция	100	18,18
Хроническая вирусная инфекция	60	10,91
Неопластический процесс	100	18,18
Доброкачественные новообразования	50	9,09
Злокачественные новообразования	50	9,09
Острая хирургическая патология	45	8,18
Все больные	550	100

2.2 Методы исследования показателей иммунного гомеостаза, математической обработки результатов

Определение показателей иммунного гомеостаза проведено в лаборатории экологической иммунологии (завлабораторией - д.м.н., профессор Л.К. Добродеева) института физиологии природных адаптации УрО РАН г.Архангельска.

Комплекс иммунологического обследования включал:

- определение лейкоцитограммы (абсолютного и относительного содержания
в периферической крови лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов,
эозинофилов);

-   исследование лимфоцитов:   определяли   фенотипы   Т-лимфоцитов и   В-
лимфоцитов,    лимфоциты    с   рецептором    СД5⁺    (общая    популяция    Т-
лимфоцитов), СДЗ⁺ (зрелые Т-лимфоциты), СД4⁺ (хелперы, индукторы), СД8⁺(цитотоксические Т-лимфоциты), СД7⁺ (клетки с рецепторами, отражающими
лимфопролиферацию), СД16⁺ (естественные киллеры), СД25⁺ (Т-лимфоциты с
рецепторами   к интерлейкину-2),   CD 23⁺ (рецептор   активированных   В-
лимфоцитов,   рецептор   для   IgE),   СД71⁺ (Т-лимфоциты   с   рецептором   к
трансферрину), HLA DR⁺ (Т-лимфоциты, активированные через рецептор к
сублокусу Главного комплекса гистосовместимости класса II), СД95⁺(клетки с
рецепторами к фактору некроза опухоли, отражающие процессы апаптоза),
СД22⁺(В-лимфоциты).       Исследовали       лимфоцито грамму:       процентное
содержание   малых,   средних,   и   больших   лимфоцитов,   функциональную
способность   лимфоцитов   в   реакции   бласттрансформации   (спонтанной,
индуцированной ФГА и коканавалином);

- исследование моноцитов: определяли моноцитограмму (процентное
содержание промоноцитов, моноцитов и полиморфноядерных клеток), индекс
пролиферации и дифференцировки моноцитов;

- исследование нейтрофильных лейкоцитов: определяли фагоцитирующую
способность нейтрофилов;

- исследование белков сыворотки крови: определяли белки системы
комплемента (СЗ,С4), пропердин - фактор В; транспортные белки и белки
острой фазы трансферрин, церулоплазмин;

- определение содержания некоторых цитокинов: интерлейкин-1 (IL-1),
интерлейкин-2 (IL-2), фактор некроза опухолей - альфа (TNFa);

- определение содержания раково-эмбрионального антигена (РЭА);
-определение содержания сывороточных иммуноглобулинов А, М, G, Е и
циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК);

- определение уровней аутоантител к двуспиральной ДНК, нуклеопротеидам, к тромбоцитам, аутогемагтлютининов, аутолейкоагглютининов.

Кровь у исследуемых лиц бралась из локтевой вены (10 мл) утром, 9-10 часов утра, натощак.

Для определения содержания лейкоцитов крови стерильным стеклянным капилляром набирали 0,008 мл крови и смешивали её с 0,1 мл 10% раствора уксусной кислоты, полученную взвесь тщательно перемешивали и заполняли камеру Горяева. Подсчитывали общее количество лейкоцитов с применением объектива х20 и окуляра х7 в 20 больших квадратах камеры Горяева и определяли по формуле абсолютное содержание клеток в 1 мл крови.

Количество клеток лейкоцитограммы (лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов, эозинофилов) подсчитывали в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе при иммерсионном увеличении объектива х90 и окуляра х7. Для регистрации клеток использовали клавишные лабораторные счётчики. Производили подсчёт 100 клеток. Данные анализа лейкоформулы выражали в процентах. Абсолютное содержание клеток лейкоцитограммы определяли подсчётом процентного содержания от общего количества лимфоцитов.

Для получения лейкоцитарной взвеси 5-10 мл венозной крови, взятой в асептических условиях в пробирку с гепарином из расчёта 20 ЕД на 1,0 мл крови, выдерживали при комнатной температуре в течение 1,5 часов для оседания эритроцитов, после чего плазму с элементами белой крови отсасывали в стерильную пробирку и центрифугировали 5 минут при 1000 об. в минуту. Надосадочную жидкость удаляли и вместо неё наливали раствор Хенкса без ионов кальция и магния в том же объёме. После смывания со дна и стенок пробирки проводили дважды дополнительное центрифугирование отмытых форм. Осадок клеток ресуспензировали в среде 199 с 10% бычьей сывороткой.

Получение отдельных популяций лейкоцитов основано на различиях удельной массы лейкоцитов разных популяций. В качестве градиента

плотности использовали водный раствор фикола с добавление верографина. Принцип метода состоит в том, что суспензию клеток помещают сверху градиента и центрифугируют. В результате те клетки, которые имеют плотность больше, чем градиент, проходят через него и скапливаются на дне пробирки, в то время как все остальные остаются над градиентом. Использование градиента позволяет разделять сумму лейкоцитов на отдельные популяции: моноцитоядерные клетки и гранулоциты.

Субпопуляции лимфоцитов определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с применением моноклональных антител (НПЦ МедБиоСпектр г. Москва). Выделение мононуклеаров из периферической крови производили по методу A.Boyum [138]. После выделения в градиенте фикол-верогафин 0,5 мл лейкоцитов наносили каплю на предметное стекло и помещали на 20 мин. в холодильник при t =40°С. По завершении инкубации остатки жидкости высушивали при комнатной температуре. На высушенную каплю наносили 20 мкл 3% раствора перекиси водорода на 10 мин для блокады эндогенной пероксидазы. Каплю промывали 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного раствора моноклональных антител, инкубировали в течение часа при комнатной температуре под чашкой Петри на влажной бумаге. Промывали препараты 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата, инкубировали до появления коричневого окрашивания при комнатной температуре. Ядра клеток докрашивали гематоксилином или раствором бриллиантового зелёного. После высушивания образцов добавляли 20 мкл 50% глицерина и считали число клеток с коричневой зернистостью при объективе х90 окуляре хЮ.

Лимфоцитограмму оценивали по величине клетки с учётом цитоплазмы и структуры ядра. В приготовленных для оценки лейкоцитограммы мазках подсчитывали относительное содержание различных в морфологическом отношении форм лимфоцитов (большие лимфоциты-клетки диаметром 10-12

47 мкм с округлым ядром и разлитой цитоплазмой, средние - клетки диаметром

10 мкм с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением, малые -диаметром 8 мкм с узким ободком цитоплазмы). По проценту больших лимфоцитов делают вывод о пролиферативной способности лимфоцитов. Содержание в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-22% характерно для человека с нормальным уровнем иммунологической реактивности, содержание больше 23% свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген, ниже 8% (от 0 до 5,11±1,02%) - снижение иммунологической реактивности организма.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов основана на феномене активности лимфоцитов под влиянием стимулов (митогенов и антигенов) с последующей трансформацией их в бласты. Реакция определяет пролиферативный потенциал изучаемых клеток. К суспензии лейкоцитов крови приливали в качестве активаторов фитогемагглютинин и конканавалин и в среде СОг при t+37°C для учёта трансформировавшихся в бласты клеток в реакцию включали радиоактивный изотоп (Н-тимидин), результаты определяли, используя автоматический сцинтилляторный счётчик

Моноцитограмму определяли по способу О.П. Григоровой [27] с учётом промоноцитов, моноцитов, полиморфноядерных моноцитов. При подсчётах учитывали по 200 соответствующих клеток.

Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с помощью тест — набора химической компании «Реакомплекс» (г. Чита). В 2 силиконовые центрифужные пробирки вносили по 0,1 мл исследуемой крови с гепарином и 0,05 мл зимозана. Взвесь перемешивали аккуратным встряхиванием пробирок и инкубировали в 30 мин. в термостате при t =37° С, повторно встряхивая через каждые 5 мин. Далее пробирки охлаждали проточной водой и центрифугировали при 1500 об/мин 5-7 минут. Надосадочную жидкость сливали и ресуспензировали в остатке жидкости. Для определения поглотительной активности нейтрофилов из полученной взвеси готовили мазки на предметных стёклах, высушивали при комнатной температуре,

48 фиксировали в смеси Никифорова 20 мин. Отмытые и высушенные мазки

микроскопировали при объективе х 90 и окуляре х 7. Оценка результатов проводилась по фагоцитарному показателю (процент фагоцитирующих клеток из числа сосчитанных нейтрофилов), а также по фагоцитарному числу (числу частиц, поглощённых одним активным нейтрофилом). Концентрацию белков в периферической крови определяли методом кинетической нефелометрии при помощи иммунохимического анализатора Эррей фирмы «Бекман». Система проводит определение в автоматическом режиме по программе.

Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини [179]. Метод основан на измерении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемой сыворотки в лунки, вырезанные в слое агара, в который предварительно диспергирована моноспецифическая сыворотка, содержащей антитела к данному классу иммуноглобулинов. В стандартных условиях опыта диаметр кольца преципитации прямо пропорционален концентрации исследуемого иммуноглобулина. Оценку колец преципитации соответствующих IgA и IgG проводили через 24 часа, соответствующих IgM через 48 часов. Уровень иммуноглобулинов определяли по калибровочной кривой, выражающей зависимость между уровнем иммуноглобулинов и диаметром колец преципитации. Концентрации сывороточных иммуноглобулинов определяли с антисыворотками научно-исследовательского Института эпидемиологии и микробиологии, а также предприятия биологических медицинских препаратов «Биомед» имени И.И. Мечникова (г. Нижний Новгород). Результаты регистрировались в г/л.

Содержание IgE определяли иммуноферментным методом диагностическими наборами производства «Dr. Fooke» (Германия) - норма 20 - 100 МЕ/мл. Реакцию оценивали с помощью фотометра «Multiskan MS» фирмы «Labsystems» (Финляндия). Количественное определение IgE осуществляется иммуноферментным методом (сэндвич вариант). В системе используются антитела, связанные с твердой фазой, и ферментативно меченые

антитела. Анализируемый образец инкубируется с иммобилизированными на стенках пробирок кроличьими антителами к IgE человека, при этом IgE, находящийся в сыворотке, связываются с твердофазной поверхностью. После промывки ферментативно меченные анти-IgE антитела добавляются в систему, образуя комплекс. За последующей инкубацией следует вторая промывка, после чего добавляется хромогенный субстрат (раствор п-нитрофенилфосфата). В образцах развивается желтая окраска, интенсивность которой измеряется фотометрически (405 нм). Концентрация IgE рассчитывается из калибровочного графика в МЕ/мл.

Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов проводили с помощью тест-набора химической компании «Реакомплекс» (г. Чита). Метод основан на нефелометрии различной растворимости мономеров иммуноглобулинов в составе иммунных комплексов в среде полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000). В пробирку набирали 5-бмл венозной крови без антикоагулянтов и инкубировали в термостате при t=+37°C в течение 2 часов для отделения сыворотки. Полученную сыворотку разводили (0,2 мл сыворотки и 0,4 мл боратного буфера). В контрольную пробирку вносили 0,2 мл разведённой сыворотки и 1,8 мл боратного буфера. В опытную пробирку -0,2 мл разведённой сыворотки и 1,8 мл ПЭГ. Обе пробирки выдерживали при комнатной температуре 2 часа. Фотометрически при длине волн 440 нм определяли процент пропускания по шкале «Т», используя кювету с длиной оптического пути 5,0253. Результаты учитывали, взяв пропускание контрольной пробы за 100%. Калибровочной кривой определяли концентрацию ЦИК в г/л.

Содержание интерлейкина-1, интерлейкина-2, TNF-a определяли методом «конкурентного» иммуноферментного анализа реактивами ВСМ Diagnostics, «CYTIMMUNE sciences INC» и CytElisa производства США с оценкой результатов на фотометре серии Мультискан производства Финляндии и регистрацией в нг/мл, с реактивами «Biosource» и оценкой результатов в пг/мл.

Количественное содержание в сыворотке крови раково-эмбрионального антигена (РЭА) проводили твердофазным «неконкурентным» методом, основанным на прямой «сэндвич» технологии с помощью иммуноферментного набора фирмы ВСМ Diagnostics (США) и «Can Ag» (Швейцария). Результаты регистрировались в нг/мл.

Для выявления антител к двухспиральной ДНК и нуклепротеидам применяли метод иммуноферментного анализа с использованием набора ENA Profile фирмы Bio-Rad (США). Bio-Rad Anti-ds DNA Test основан на твердофазовом иммуносорбентном анализе, при котором аналит является показателем цветной реакции конъюгата фермента. Для анализа используются планшеты, лунки которых покрыты специально спирализованной двухспиральной ДНК. ДНК является сильно заряженной молекулой, благодаря чему может неспецифически связываться с другими иммуноглобулинами при добавлении к анти-DNA антителам. При добавлении разбавленной сыворотки в ячейки анти-ds DNA связываются с антигеном. После инкубирования и отмывки в каждую ячейку вносится субстрат ТМБ. Наличие коньюгата анти-ds DNA/DNA приводит к образованию изменения окраски. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству анти-ds ДНК, находящемуся в исходном образце. Набор стандартов, калиброванных по первому. Уровни аутоантител к двухспиральной ДНК, нуклеопротеидам согласно предложенным концентрациям в образцах используемых наборов, регистрировались в МЕ/мл (аутоантитела к ДНК до 50МЕ/мл, к нуклеопротеидам до 1 МЕ/мл).

Сывороточные аутоантитела к лейкоцитам и эритроцитам определяли в реакциях лейкоагглютинации и гемагглютинации, для постановки которых использовали 0,1 мл 2 % взвеси в физиологическом растворе соответствующих аутоклеток. Исследуемые сыворотки подогревали 30 мин. при 56°, готовили двукратные их разведения сывороткой группы АВ.

Для постановки гемагглютинации к каждому объёму сыворотки (0,1 мл) добавляли 0,1 мл 1% взвеси аутоэритроцитов и оставляли при комнатной

температуре на 2 часа. В реакции лейкоагглютинации к исследуемой сыворотке в объёме 0,2 мл добавляли 0,1 мл суспензии лейкоцитов, инкубировали 90 минут при 37°С, затем добавляли 0,1мл 1% раствора уксусной кислоты для растворения эритроцитов. Результаты гемагглютинации и лейкоагглютинации учитывали в толстой капле.

Аутоантитела к тромбоцитам, аутогемагглютинины, лейкоагглютинины, определяли в разведениях (1/5, 1/20, 1/40, 1/80, 1/60и т.д.), титры которых регистрировались в log₂.

Статистический анализ. Результаты исследования обработаны с помощью пакетов программ по статистической обработке данных Microsoft Excel, SPSS (версия 11) for Windows. Числовые характеристики представлены в виде средняя арифметическая ± ошибка средней, стандартного отклонения, как медиана и интерквартильные ранги при распределении, отличающемся от нормального. Распределение показателей признавалось нормальным, если имелось примерное равенство средних значений, примерная симметричность минимальных и максимальных значений относительно среднего значения, коэффициенты ассиметрии и эксцесса не превышали 2 по абсолютной величине. Достоверность различий между группами определяли по критерию t Стьюдента (с поправкой Бонферрони при множественном сравнении) и с использованием непараметрических тестов - %², Mann-Whitney Test и Kruskal-Wallis Test. Применялся однофакторный дисперсионный анализ ANOVA. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05. Проводился корреляционный анализ с определением коээфициентов линейной корреляции Пирсона, непараметрического коэффициента ранговой корреляции Спирмена, а также однофакторный и многофакторный регрессионный анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Содержание аутоантител и особенности иммунологической реактивности у практически здоровых людей

Анализ лабораторных исследований, включающий определение уровня аутоантител к двухспиральной ДНК, нуклеопротеидам, к тромбоцитам, а также аутогемагглютининов, аутолейкоагглютининов у практически здоровых жителей Севера Европейского территории РФ выявил весь спектр изучаемых аутоантител в различных концентрациях.

Таблица 5

Частота регистрации аномально высоких уровней аутоантител у практически

здоровых лиц, п=158

Исследуемые аутоантитела	Количество исследований	Количество повышенных уровней ААТ	Частота повышенных уровней ААТ
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	112	30	26,79%
ААТ к RNP, МЕ/мл	77	8	10,39%
ААТ к тромбоцитам, log₂	72	9	12,5%
АутоГемА, Iog2	98	18	18,37%
АутоЛейкА, Iog2	35	11	31,43%

Повышенные уровни аутоантител обнаружены у 49 практически здоровых (31,01%). Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител у практически здоровых северян колеблется от 10,39% при обнаружении аутоантител к нуклеопротеидам до 31,43% при обнаружении аутолейкоагглютининов. Чаще регистрируется повышение уровней аутолейкоагглютининов - 31,43%, аутоантител к двухспиральной ДНК -26,79%, аутогемагглютининов-18,37%, реже аутоантитела к тромбоцитам -12,5%, нуклеопротеидам - 10,39%. Пограничные концентрации аутоантител к

двухспиральной ДНК (49МЕ/мл) выявляются в 2,68% случаев, аутоантител к нуклеопротеидам в 3,9% случаев.

Рис. 1. Частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител у

практически здоровых жителей Севера Европейской территории РФ.

1- Аутолейкоагглютинины, 2- ААТ к ds-DNA, З-Аутогемагглютинины,

4- ААТ к тромбоцитам, 5- ААТ к нуклеопротеидам

При анализе количественных концентраций аутоантител у практически здоровых выявлено, что средние уровни аутоантител не превышают физиологической нормы, однако пределы колебания значений имеют размах до аномально высоких. Вариационные ряды содержания аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам близки к нормальному распределению. Средний уровень аутоантител к двухспиральной ДНК составляет 44,79±1,20 МЕ/мл, минимальный уровень концентрации 22 МЕ/мл, максимальный - 94 МЕ/мл, причем максимальный уровень 94МЕ/мл зарегистрирован только у одной практически здоровой женщины в возрасте 72 лет. Размах колебания составляет 72, что обусловило относительно высокую ошибку среднего значения и стандартное отклонение. Средний уровень аутоантител к нуклеопротеидам составляет 0,59 МЕ/мл, пределы колебаний среднего - 0,18 - 1,66 МЕ/мл.

Вариационные ряды содержания аутоантител к антигенам клеточной поверхности отличаются от нормального распределения.

Таблица 6 Среднее содержание аутоантител у практически здоровых лиц, п=158

Аутоантитела	N	M±m	М±5	Min	Мах
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	112	44,79±1,20	44,79±12,74	20	94
ААТ к RNP, МЕ/мл	77	0,59±0,04	0,59±0,35	0,18	1,66
ААТ к тромбоцитам, log₂	72	3,96±0,10	3,96±0,83	3,33	8,33
АутоГемА, Iog2	98	4,65±0,13	4,65±1,31	3,33	8,33
АутоЛейкА, log₂	35	4,99±0,21	4,99±1,24	3,33	7,33

Средний уровень аутоантител к тромбоцитам и аутогемагглютининов также не превышает физиологический предел, соответственно 3,96±0,10 и 4,65±0,13 Iog2, медиана данных аутоантител и размах колебаний были одинаковыми: медиана - 4,3, размах колебаний - 5. Среднее содержание аутолейкоагглютининов - 4,99±0,21 log₂ - несколько выше по содержанию, чем среднее содержание аутоантител к тромбоцитам (3,96±0,10 log₂), аутогемагглютининов (4,65±0,13 log₂), соответственно выше медиана - 5,33, но меньше пределы колебаний - 3,33 - 7,33 log₂.

При сравнении частоты регистрации аномальных концентраций в период биологических сумерек в ноябре и в феврале, а также в период восстановления естественной солнечной радиации - в мае - выявлены различия. Повышенные уровни аутоантител в ноябре обнаружены у 21,79%, в феврале у 46,30%, в мае у 40% северян. Достоверные различия выявлены при сравнении частоты регистрации аномальных концентраций аутоантител в ноябре и феврале (х²⁼8,83, р<0,01).

Частота регистрации аномальных концентраций аутоантител к двухспиральной ДНК достоверно увеличивается с 6,38% в ноябре до 41,51% в феврале (р<0,001), аутоантител к тромбоцитам с 3,51% в ноябре до 75% в феврале (р<0,001) и снижаются в мае (38,46% и 8,33% соответственно, р<0,01). Регистрируемая частота повышенных концентраций аутоантител к нуклеопротеидам увеличивается с 10,53% в ноябре до 16,33% в феврале, в мае

аномальные уровни аутоантител к нуклеопротеидам не зарегистрированы (р>0,05).

Рис.2. Частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител у

практически здоровых в исследуемые периоды.

1- ААТ к ds-DNA, 2- ААТ к нуклеопротеидам, 3- ААТ к тромбоцитам,

4- Аутолейкоагглютинины

Частота регистрации повышенных концентраций аутогемагглютининов увеличивается с 18,18% в ноябре до 25% в феврале, в мае частота аномальных титров аутогемагглютининов нарастает до 42,86% (р>0,05). Повышенные титры аутолейкоагглютининов выявлены в 26,32% случаев в ноябре и повышаются к февралю до 66,67% (р<0,01), в мае отмечается некоторое снижение до 57,14%, однако различие недостоверно (р>0,05). Данная закономерность подтверждается аналогичным изменением титров перечисленных аутоантител в исследуемые периоды.

Средняя концентрация аутоантител к двухспиральной ДНК достоверно и значительно возрастает в феврале с 38,72±1,28 МЕ/мл до 49,68±1,94МЕ/мл (р<0,000), в мае фактически сохраняется на том же уровне - 46,40±2,59 МЕ/мл (р<0,01). Содержание аутоантител к тромбоцитам достоверно увеличивается с 3,84±0,08 log₂ до 5,83±0,871og₂ после периода биологической тьмы (р<0,001) и

достоверно снижается в мае, в период восстановления солнечной активности — 4,25±0,391og₂ (p<0,05).

Таблица 7

Среднее содержание аутоантител у практически здоровых в исследуемые

периоды (М±т)

Ауто антител а	ноябрь	февраль	май
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	38,72±1,28	49,68±1,94***	46,60±2,59***
ААТ к RNP, МЕ/мл	0,59±0,05	0,61±0,06	0,56±0,05
ААТ к тромбоцитам, log₂	3,84±0,08	5,83±0,87***	4,25±0,39^л
АутоГемА, Iog2	4,81±0,14	5,33±1,ОО	5,33±0,48
АутоЛейкА, Iog2	4,91±0,27	5,66±0,88	5Д1±0,38

Примечание: р - уровень достоверности с поправкой Бонферрони,

*** -р<0,001 при сравнении с ноябрем; ^л -р<0,05 при сравнении с февралем

Аналогичные изменения наблюдаются в динамике содержания всех исследуемых аутоантител. Так, концентрация нуклеопротеидов возрастает с 0,59±0,05МЕ/мл в ноябре до 0,61±0,06МЕ/мл, в мае значительно снижается до 0,56±0,05МЕ/мл.

Рис.3. Динамика изменения титров аутоантител по log₂ у практически здоровых в анализируемые периоды.

Содержание аутогемагглютининов увеличивается с 4,81±0,14 до 5,33±1,00 Iog2 в феврале, в мае сохраняется на том же уровне - 5,33±0,481og₂. Средняя концентрация аутолейкоагглютининов нарастает с 4,91±0,271og₂ в ноябре до 5,66±0,881og₂. в феврале и снижается к маю до 5,ll±0,381og₂. Динамика изменения средних концентраций аутоантител к нуклеопротеидам, аутогемагглютининов и аутолейкоагглютининов очевидна, но статистической достоверности не достигает (р>0,05),(рис.З).

При анализе динамики суммарных изменений титров исследуемых аутоантител к антигенам клеточных цитоплазматических мембран по log₂ также среднее их содержание достоверно возрастает с 4,38±0,071og₂ в ноябре до 5,60±0,491og₂ в феврале (р<0,01) и снижается в мае до 4,93±0,251og₂.

Методом множественного сравнения (Кру скал-Вал лис тест) достоверные различия выявлены при сравнении концентраций аутоантител к двухспиральной ДНК (Chi-sq.- 23,24, df - 4, sig.<0,001), аутоантител к тромбоцитам (Chi-sq. -10,37, df-2, sig.< 0,01) в исследуемые периоды.

Проведен сравнительный анализ содержания исследуемых аутоантител в возрастных группах 20-49 лет и 50-75 лет. Средние уровни аутоантител в возрастных группах также не превышают границы физиологического предела. Содержания аутоантител к двухцепочечной ДНК - 46,59±1,65 МЕ/мл, аутоантител к тромбоцитам - 4,17±0,14 log₂, аутогемагглютининов - 4,77±0,16 log₂ достоверно выше в возрастной группе 50-75 лет (р<0,05).

Таблица 8

Сравнение содержания исследуемых аутоантител в анализируемых возрастных группах практически здоровых

Аутоантитела	п	20-49 лет	п	50-80 лет
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	39	41,43±1,42	73	46,59±1,65*
ААТ к RNP, МЕ/мл	22	0,57±0,04	55	0,60±0,05
ААТ к тромбоцитам, log₂	53	3,88±0,12	19	4,17±0,14*
АутоГемА, log₂	71	4,33±0,16	27	4,77±0,20*
АутоЛейкА, log₂	28	5,15±0,23	7	4,33±0,44

Примечание. * - р<0,05, ** - р<0,01

В старшей возрастной группе 50-75 лет наиболее часто выявляются аномально высокие концентрации аутоантител к двухспиральной ДНК -31,51%, аутоантитела к нуклеопротеидам - 14,55%, аутоантител к тромбоцитам - 10,53%. Повышенные уровни аутолейкоагглютининов зарегистрированы в 14,29%, аутогемагглютининов в 11,11%, случаев.

Таблица 9

Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител у практически здоровых в возрастных группах (в %), п=158


Аутоантитела	20-49 лет		50-75 лет
Аутоантитела
абс.кол-во	%	абс.кол-во	%
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	7	17,95	23	31,51
ААТ к RNP, МЕ/мл	-	-	8	14,55
ААТ к тромбоцитам, log₂	3	5,66	2	10,53
АутоГемА, log₂	8	11,26	3	11,11
АутоЛейкА, Iog2	4	14,28	1	14,29

При сравнении частоты регистрации повышенных концентраций исследуемых аутоантител между возрастными группами выявленные различия не достигают статистической достоверности (р>0,05). Повышенные концентрации аутоантител к нуклеопротеидам у практически здоровых в возрастной группе 20-49 лет не регистрировались.

При проведении анализа уровня содержания аутоантител к ds-DNA в сыворотке крови здоровых людей разных возрастных групп выявлено нарастание уровней содержания аутоантител с возрастом, наиболее значимое увеличение содержания аутоантител регистрируется с60 лет вне зависимости от пола. Уровень аутоантител к ds-DNA в данной возрастной группе составляет 50,71±2,38МЕ/мл (минимальное значение - 28МЕ/мл, максимальное - 94МЕ/мл) и достоверно отличается от других возрастных групп. Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител в данной возрастной группе составляет 41,67% и достоверно отличается от частоты повышенных уровней аутоантител к ds-DNA в возрастной группе 20-29 лет

(8,33%, р<0,05). В других возрастных группах отличий от генеральной совокупности не выявлено.

Таблица 10

Сравнение содержания аутоантител к двухспиральной ДНК в возрастных группах практически здоровых

Возрастные группы	п	ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	Р
20-29 лет	12	41,75±1,80	Pl-5*
30-39 лет	7	48,42±2,41
40-49 лет	20	38,79±2,20	РЗ-5*
50-59 лет	37	42,58±2,11	Р4-5*
60-75 лет	36	50,71±2,38	Р5-4,Р5-3,Р5-1*

Примечание. * - р<0,05, - р<0,01, ** - р<0,01

На представленном ниже графике (рис.4) отображено распределение уровней концентраций аутоантител по частоте регистрации в различных возрастных группах.

Рис.4. График вариации аутоантител к двухспиральной ДНК в сыворотке крови практически здоровых людей.

Как видно, в возрастной группе 20-29 лет у 91,67% исследуемых уровень концентрации аутоантител к ds-DNA не превышает уровня физиологической границы - 50МЕ/мл, в группе 40-49 лет - 80%, 50-59 лет -78,38% и в старшей возрастной группе - 58,33%. Уровни концентраций

аутоантител выше 55МЕ/мл не зарегистрированы в возрастных группах 20-49 лет, тогда как в возрастной группе 50-59 лет они выявлялись в 13,51% случаев, а в возрасте 60-75 лет в 30,56% случаев и в 25% случаев концентрация аутоантител превышала бОМЕ/мл. Итак, с возрастом имеется тенденция к уменьшению частоты регистрации нормальных концентраций аутоантител и, соответственно, увеличивается частота регистрации их аномальных концентраций.

Проведено исследование зависимости содержания и частоты регистрации повышенных концентраций аутоантител от половой принадлежности у практически здоровых лиц.

Таблица 11

Среднее содержание и частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител в зависимости от пола, п=158


Аутоантитела	Женщины	Мужчины	Частота повышенных уровней (%)
Аутоантитела
(абс.ч.)	(абс.ч.)	жен	муж
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	46,72±1,73	43,34±1,81	31,75	24,32
ААТ к RNP, МЕ/мл	0,63±0,06	0,54±0,05	15,56	3,57
ААТ к тромбоцитам, log₂	3,89±0,09	4,15±0,26	4,88	13,64
АутоГемА, Iog2	4,70±0,20	4,54±0,02	20,93	14,29
АутоЛейкА, log₂	4,64±0,36	5,27±0,27	23,08	38,89

Средний уровень содержания аутоантител к двухцепочечной ДНК, нуклеопротеидам, аутогемагглютининов у женщин выше, чем у мужчин (46,72±1,73МЕ/мл, 0,63±0,06МЕ/мл, 4,70±0,201og₂) и выше средних показателей всей группы практически здоровых. Среднее содержание аутоантител к тромбоцитам (4,15±0,261og₂), аутолейкоагглютининов (5,27±0,271og₂) у практически здоровых мужчин выше, чем у женщин (3,98±0,09 и 4,64±0,361og₂ соответственно). Однако различия между уровнями содержания аутоантител у женщин и мужчин статистически незначимы (р>0,05). Аналогичные тенденции выявлены при анализе частоты регистрации

аномальных концентраций аутоантител по полу. В нашем исследовании у женщин чаще, чем у мужчин регистрируются аномально высокие уровни аутоантител к двухспиральной ДНК (31,75% против 24,32%), к нуклеопротеидам (15,56% против 3,57%), аутогемагглютининов (20,93% против 14,29%), тогда как у мужчин чаще регистрируется повышенное содержание аутолейкоагглютининов (38,89% против 23,08%), аутоантител к тромбоцитам (13,64% против 4,88%). Однако, при сравнении частоты регистрации аномально высоких концентраций аутоантител по половой принадлежности различия не достоверны (р>0,05). Анализ содержания исследуемых аутоантител по полу в исследуемых возрастных группах, достоверных различий также не выявил (р>0,05).

Представляло интерес изучить состояние иммунной системы и сравнить характер изменений некоторых ее показателей у практически здоровых лиц с аномально высокими уровнями аутоантител (1 группа) и у практически здоровых лиц, концентрации аутоантител у которых не превышают уровень физиологической нормы (2 группа).

В первой анализируемой группе практически здоровых лиц с аномально высокими уровнями аутоантител к ds-DNA достоверно ниже уровень содержания абсолютного числа лейкоцитов (5,70±0,48х10⁹/л против 6,80±0,34х10⁹/л, р<0,05), лейкопения зарегистрирована в 3,23% случаев, повышенные уровни наблюдаются 6,45% в случаев, в группе сравнения -21,33% случаев. Среднее содержание относительного и абсолютного количества лимфоцитов ниже в первой группе практически здоровых -1,85±0Д5хЮ⁹/л против 2,24±0,09х10⁹/л, (р<0,01), абсолютная лимфопения отмечается в 9,1% случаев, тогда как в группе с нормальным содержанием аутоантител в 15,19% регистрируются повышенные уровни абсолютного и в 36,71% случаев относительного количества лимфоцитов. Анализ лимфоцитограммы свидетельствует о невысоком уровне спонтанной лимфопролиферации. Содержание больших гранулярных лимфоцитов не превышает верхнюю границу физиологической нормы и составляет в среднем

6,60±0,65% и 8,06±0,41% в группе с нормальным содержанием аутоантител (р<0,05).

Таблица 12

Сравнение показатели гемограммы (М±тх10⁹/л, М±т,%) в анализируемых

группах практически здоровых

Показатели	ААТ к ds-DNA >50МЕ/мл	ААТ к ds-DNA < 50МЕ/мл
Лейкоциты, хЮ⁹/л	5,70±0,48	6,80±0,34*
Лимфоциты, х10⁹/л	1,85±0,15	2,24±0,09**
Лимфоциты большие, %	6,60±0,65	8,06±0,41*
РБТЛ с ФГА, %	36,65±2,37	45,82±1,59***
РБТЛ с КонА, %	51,14±3,62	64,91±2,39***
Моноциты, х10⁹/л	0,52±0,67	0,65±0,05*
промоноциты, %	60,80±0,91	58,54±0,48*
Индекс пролиферации	1,26±0,03	1,19±0,01*
Нейтрофилы, хЮ /л	3,18±0,27	3,73±0,21*

Примечание. *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001

Практически такие же результаты получены в условиях in vitro при культивировании лимфоцитов без митогена - 6,73±0,60% в первой группе и -7,69±0,35% во второй.

Рис.5. Активность реакции бласттрансформации лимфоцитов в

анализируемых группах.

Отмечается довольно низкая активность РБТЛ с фитогемагглютинином в группе практически здоровых с аномально высокими концентрациями аутоантител - 36,65±2,37% против 45,82±1,59% (р<0,001), частота дефицита активности РБТЛ, стимулированной данным митогеном, составляет 93,10% и достоверно отличается от группы сравнения 70,51% (х,²=6,03, р<0,05).

Бласттрансформация В-лимфоцитов под влиянием конканавалина составляет 51,14±3,62% в первой группе и достоверно выше в группе с нормальным содержанием аутоантител - 64,91 ±2,39% (р<0,001). Частота дефицита активности индуцированной бласттрансформации В - лимфоцитов составляет 58,62% в группе с аномально высокими концентрациями аутоантител, что достоверно отличается при сравнении с анализируемой группой (28,21%, х²⁼8,44, р<0,01). Частота повышенных уровней активности РБТЛ, стимулированной данным митогеном, достоверно выше во второй группе 43,59%, чем в первой - 20,69% (%²=4,74, р<0,05).

В составе моноцитограммы велико содержание промоноцитов - 60,80±0,91% против 58,54±0,48% в группе сравнения, (р<0,05) на фоне более низкого уровня функционально активных клеток (15,30±0,65% и 16,21±0,47% в группе сравнения). Индекс пролиферации значительно выше нормы (0,5) и составляет в усредненных результатах - 1,26±0,03, превышая физиологический предел всей исследуемой группы практически здоровых -1,19±0,01 (р<0,05).

Существенных различий в содержании эозинофильных лейкоцитов не выявлено. Содержание абсолютного количества нейтрофилов значительно ниже в группе лиц с аномальными концентрациями аутоантител (3,18±0,27 против 3,73±0,21х10⁹/л во второй группе, р<0,05). Абсолютная нейтропения выявляется у 36,36% практически здоровых первой группы и достоверно отличается от показателей группы сравнения - 17,95% (%²=4,38; р<0,05). Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов характеризуется высокой интенсивностью фагоцитоза в обеих группах, фагоцитарное число в усредненных результатах составляет 6,29±0,35% и 7,42±0,51%, при явном

дефиците фагоцитарной защиты и низкой активности нейтрофильных лейкоцитов в реакции фагоцитоза. Среднее значение фагоцитарного числа и процент активных фагоцитирующих клеток (51,62±2,34%) в первой группе практически здоровых лиц ниже, чем в группе с нормальным содержанием аутоантитела к ds-DNA, но различие не достоверно (р>0,05).

Таблица 13

Среднее содержание фенотипов лимфоцитов у практически здоровых в

анализируемых группах

Показатели	AAT к ds-DNA > 50МЕ/мл	AAT к ds-DNA < 50МЕ/мл
CD3+,xlO7n	0,64±0,07	0,88±0,04***
CD5+,xlO7fl	0,74±0,07	0,94±0,04***
CD4+,x107ji	0,46±0,03	0,59±0,02***
СО8+,х107л	0,39±0,05	0,56±0,03***
CD10+,xl07n	0,22±0,02	0,28±0,02**
CD25+,xlO7n	0,32±0,03	0,44±0,03***
CD71+,xlO7n	1,11 ±0,24	0,98±0,07
HLADR+, хЮ7л	0,57±0,ll	0,71±0,05***
CD16+,xlO7n	O,3O±O,O3	0,45±0,02***
CD95+,xlO7n	0,46±0,06	0,53±0,03*

Примечание: *- р<0,05, **- p<0,01, ***- p<0,001

В наших исследованиях в периферической крови всех обследуемых практически здоровых отмечается низкое содержание Т-лимфоцитов с маркерами CD5+ и CD3+. При этом значительно ниже в группе лиц с аномально высокими уровнями концентрации аутоантител - 0,74±0,07х107л и 0,64±0,07х107л соответственно (р<0,001). Дефицит содержания Т лимфоцитов в первой группе составляет 84,85% и 65,38%, во второй (х²=4,28, р<0,05). Среднее содержание Т-хелперов в крови в обеих группах в пределах физиологической нормы. Концентрация CD4+ в первой группе -0,46±0,03х107л, что существенно ниже, чем в сравниваемой группе

0,59±0,0210⁹/л (р<0,01). Дефицит их содержания наблюдается в 39,4% случаев, а во второй группе в 18,99% случаев регистрируются повышенные уровни CD4+ и только в 16,46% ниже физиологической нормы (х²=6,87, р<0,01). Содержание цитотоксических лимфоцитов в периферической крови у практически здоровых второй группы выше физиологической нормы (0,56±0,03х10⁹/л) и существенно выше, чем содержание CD8+ в группе с аномальными концентрациями аутоантител (0,39+0,05x10% при р<0,001), в которой также в 12,5% случае регистрируются уровни CD8+ ниже физиологической границы.

Рис.6. Частота регистрации дефицитов некоторых фенотипов лимфоцитов в анализируемых группах практически здоровых.

Повышенные уровни цитотоксических клеток выявлены в 31,25% случае в группе с аномально высокими концентрациями аутоантител и в 67,61% случаев во второй группе (x²⁼l 1,85; р<0,001).

Уровни Т лимфоцитов с маркерами CD 10+, CD25+, HLADR+, содержание естественных киллеров CD 16+ соответствуют физиологическим границам, в рамках которых выявлены статистически значимые различия (табл.13). Содержание указанных клеток в среднем составляет: 0,22±0,02х10⁹/л, 0,32±0,03х10⁹/л, 0,57+0,11x10%, 0,30+0,03x10% и во всех случаях достоверно ниже, чем в группе с нормальным содержанием

аутоантител (р<0_}001). Повышенные уровни CD 16+, CD 10+ в первой группе практически здоровых не регистрировались.

Среднее содержание Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину CD71+ в группе с повышенным содержанием аутоантител в 50% случаев выше физиологической нормы, однако при сравнении содержания в обеих анализируемых группах достоверного различия не выявлено (р>0,05). Среднее содержание Т-лимфоцитов с рецептором к фактору некроза опухоли (CD95+) достоверно выше (0,53±0,03хЮ⁹/л) в группе с нормальным содержанием аутоантител, чем в первой группе (0,46±0,06х10⁹/л, р<0,05).

Таблица 14

Показатели гуморального иммунитета в анализируемых группах практически

здоровых

Показатели	ААТ к ds-DNA >50МЕ/мл	ААТ к ds-DNA < 50МЕ/мл
СО22+,хЮ7л	0,39±0,03	0,51±0,02***
IgA, г/л	0,77±0,06	0,96±0,05*
IgE, г/л	100,94±7,94	80,56±3,64**
ЦИК крупные, г/л	3,14±0,17	2,48±0,11***
Трансферрин, г/л	4,26±0,14	3,56±0,11**
РЭА, нг/мл	3,75±0,50	1,75±0,14***
Аутолейкоагглютинины,^2	6,00±0,21	4,89±0,24*
ААТ к RNP, МЕ/мл	0,79±0,08	0,49±0,04***
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	60,12±1,71	38,39±0,80***

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001

Содержание антителообразующих клеток, фенотипируемых как CD22+, у практически здоровых, с уровнем концентрации аутоантител к двухспиральной ДНК меньше 50МЕ/мл, выше физиологического уровня (0,51±0,02х10⁹/л) и достоверно выше в группе практически здоровых с аномально высокими уровнями аутоантител (0,39±0,03х10⁹/л, р<0,001),

причем частота регистрации повышенных уровней В-лимфоцитов во второй группе также достоверно выше - 58,9% против 31,03% (% =6,45, р<0,05).

Токсическая концентрация ЦИК регистрируется в обеих исследуемых группах, однако у лиц с аномально высокими уровнями аутоантител, уровень ЦИК (средних и крупных) достоверно выше (3,14±0,17г/л против 2,48±0,11г/л в группе сравнения, р<0,001), достоверно выше и частота регистрации повышенных концентраций - 84,38% против 60,76% (%²=5,80, р<0,05).

Рис.7. Частота регистрации повышенных уровней некоторых показателей

гуморального иммунитета.

Уровень IgE в группе лиц с аномально высокими концентрациями аутоантител к ds-DNA выше границы физиологического предела (100,94±7,94МЕ/мл) и выше содержания IgE во второй анализируемой группе (80,56±3,64МЕ/мл; р<0,01). Частота регистрации повышенных концентраций реагинов в первой группе составляет 50%, во второй - 22,08% (%=8,03; р<0,01). Уровень IgA в обеих анализируемых группах ниже физиологической нормы и достоверно ниже в группе с повышенным содержанием аутоантител (0,77±0,06г/л против 0,96±0,05г/л в группе сравнения, р<0,05).

Уровень содержания трансферрина в сыворотке практически здоровых с аномально высокими концентрациями аутоантител к ds-DNA выше физиологической границы (4,26±0,14г/л) и достоверно выше содержания

сравниваемой группы (3,56±0,11г/л; р<0,01). Группы различаются и по частоте регистрации повышенных концентраций - 85,19% в первой группе и 47,37% во второй (х²=11,64; р<0,001).

Раково-эмбриональный антиген у практически здоровых в обеих группах в пределах физиологической нормы, однако значительно выше в группе с аномально высокими уровнями аутоантител (3,75±0,50 против 1,75±0,14нг/мл; р<0,001). В данной группе практически здоровых зарегистрировано 14,81% повышенных концентраций РЭА, в группе сравнения повышенных концентраций не выявлено.

Содержание провоспалительных цитокинов (IL-2, TNF-a) в группе лиц с аномальными концентрациями аутоантител было выше, чем в сравниваемой группе, однако достоверных различий в концентрациях исследуемых цитокинов у практически здоровых не выявлено (р>0,05).

Содержание аутоантител к тромбоцитам, аутогемагглютининов в обеих анализируемых группах не различаются. В группе с. аномально высокими концентрациями аутоантител к двухспиральной ДНК достоверно выше содержание аутолейкоагглютининов (6,00±0,21 log₂ против 4,89±0,24 log₂; р<0,05), аутоантител к нуклеопротеидам (0,79±0,08 МЕ/мл против 0,49±0,04 МЕ/мл, р<0,001). У практически здоровых с аномально высокими уровнями аутоантител к двухцепочечной ДНК в 22,3% случаях регистрировались повышенные уровни аутоантител к нуклеопротеидам. Повышение концентрации аутоантител к нуклеопротеидам выше физиологических границ в 72,73% случаях сочеталась с аномально высокими уровнями аутоантител к ds-DNA.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что у жителей Севера Европейской территории РФ определяется широкий спектр аутоантител (к двухспиральной ДНК, рибонуклеопротеидам, тромбоцитам, аутогемагглютинины, аутолейкоагглютинины) и высокий уровень регистрации повышенных их концентраций (от 10,39% до 31,43% в зависимости от специфичности).

Средние уровни аутоантител не превышают физиологический предел, однако пределы колебания значений имеют размах до аномально высоких.

Содержание аутоантител и частота регистрации аномальных концентраций нарастают с периода биологических сумерек в ноябре, достигают максимума в феврале и снижаются в мае, в период восстановления естественной солнечной радиации.

В наших исследованиях не установлено различий в уровне содержания и частоте регистрации повышенных концентраций аутоантител в зависимости от пола.

Выявлено нарастание уровней содержания аутоантител с возрастом, наиболее значимое увеличение содержания аутоантител регистрируется с 60 лет вне зависимости от пола.

Повышение содержания аутоантител у практически здоровых сопряжено со снижением содержания лейкоцитов, лимфоцитов, нейтрофилов и сочетается с процессами активизации пролиферации и повышением молодых форм моноцитов. Снижение функциональной активности иммуннокомпетентных клеток сопровождается низкой активностью реакции бласттрансформации лимфоцитов с митогенами снижением содержания дифференцированных Т-клеток (CD3+, CD5+, HLADR+, CD8+, CD 16+, CD95+), а также ростом токсических концентрации ЦИК, гиперпродукцией IgE, трансферрина, повышением содержания РЭА.

3.2. Содержание аутоантител и особенности иммунологической реактивности у больных людей

При изучении содержания исследуемых аутоантител к двухспиральной ДНК, рибонуклеопротеидам, тромбоцитам, аутогемагглютининов, аутолейкоагглютининов, у пациентов вне зависимости от патологии выявлен весь спектр изучаемых аутоантител в различных концентрациях. Статистически значимых различий спектра выявленных аутоантител у больных и практически здоровых людей не выявлено (р>0,05).

Таблица 15

Частота регистрации аномально высоких уровней аутоантител у больных вне

зависимости от патологии, (%) п=560

Аутоантитела	п	Повышено	Больные	Практически здоровые
ААТ к ds-DNA	343	269	78,42%***	26,79%
AATkRNP	234	119	50,85%***	10,39%
ААТ к тромбоцитам	379	270	71,24%***	12,5%
Аутогемагглютинины	319	276	86,52%***	18,37%
Аутолейкоагглютинины	218	168	77,06%***	31,43%

Примечание. Достоверность различий между группой больных и практически здоровых - ***- р<0,001

Частота регистрации аномально высоких концентраций исследуемых аутоантител у больных существенно выше, чем у практически здоровых лиц (р<0,001) и находится в пределах от 50,85%, при обнаружении аутоантител к нуклеопротеидам, до 86,52% при выявлении аутогемагглютининов.

Рис.8. Частота выявления аномально высоких концентраций аутоантител у

больных и практически здоровых.

1-ААТ к ds-DNA, 2- ААТ к нуклеопротеидам, 3- ААТ к тромбоцитам, 4- Аутогемагглютинины, 5- Аутолейкоагглютинины

Чаще регистрируется повышение аутогемагглютининов (86,52%), аутоантител к двухспиральной ДНК (78,42%), аутолейкоагглютининов (77,06%), аутоантител к тромбоцитам (71,24%), у половины обследованных больных - аутоантитела к нуклеопротеидам (50,85%). Пограничные концентрации аутоантител к двухспиральной ДНК регистрируются в 3,79% случаев (у практически здоровых в 2,68% случаев), аутоантител к нуклеопротеидам - в 3,42% случаев (у практически здоровых в 3,9% случаев).

Аномально высокие концентрации аутоантител к ds-DNA в 53,57% случаев сочетается с аномально высокими концентрациями аутоантител к нуклеопротеидам. Повышение уровня аутоантител к нуклеопротеидам больше 1,0 МЕ/мл в 95,49% случаях сочетается с аномально высокими концентрациями аутоантител к двухспиральной ДНК.

Вариационные ряды содержания аутоантител к ds-DNA, нуклеопротеидам, тромбоцитам у больных близки к нормальному распределению. При оценке количественных концентраций у больных вне зависимости от патологии выявлено, что средние уровни почти всех исследуемых аутоантител выше физиологических пределов и значительно отличаются от средних уровней аутоантител у практически здоровых лиц (р<0,001).

Таблица 16 Содержание аутоантител у больных вне зависимости от патологии, п=560

Аутоантитела	N	M±m	М±5	Min	Мах
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	343	54,99±0,53	54,99±9,75	22	94
ААТ к RNP, МЕ/мл	234	1,01±0,03	1,01±0,47	0,18	2,48
ААТ к тромбоцитам, Iog2	379	5,63±0,06	5,63±1,29	3,33	8,33
АутоГемА, Iog2	319	6,75±0,06	6,75±3,33	3,33	8,33
АутоЛейкА, Iog2	218	6,42±0,07	6,42±1,14	3,33	8,33

Средняя концентрация аутоантител к двухспиральной ДНК составляет 54,99±0,53 МЕ/мл, что выше принятой нормы (50МЕ/мл) и значительно выше средних показателей у практически здоровых - 44,79±1,20МЕ/мл (р<0,001).

Размах колебаний составляет 72, причем 75% обследованных больных имеют уровень концентрации аутоантител к ds-DNA выше 50МЕ/мл.

Несмотря на относительно высокую частоту регистрации аномально высоких концентраций аутоантител к нуклеопротеидам у больных (50,85%), средний их уровень едва превышает физиологический предел (1,01±0,03 МЕ/мл), но пределы колебаний концентраций значительные от 0,18 до 2,48 МЕ/мл у больных (0,18 - 1,66 МЕ/мл у практически здоровых). Среди аутоантител к антигенам клеточной поверхности, выявлено наибольшее содержание аутогемагглютининов - 6,75±0,061og₂, аутолейкоагглютининов -6,42±0,07 Iog2, содержание аутоантител к тромбоцитам несколько меньше -5,63±0,06 Iog2, но также выше физиологического предела.

Проведен сравнительный анализ содержания исследуемых аутоантител в возрастных группах больных 20-49 лет и 50-75 лет. Статистически значимых различий спектра выявленных аутоантител в возрастных группах больных не установлено (р>0,05).

Таблица 17

Сравнение содержания исследуемых аутоантител в анализируемых

возрастных группах больных

Аутоантитела	п	20-49 лет	п	50-80 лет
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	193	53,92±0,70	120	56,64±0,84**
ААТ к RNP, МЕ/мл	125	0,95±0,04	86	1,09±0,05*
ААТ к тромбоцитам, log₂	232	5,75±0,08	105	5,65±0,13
АутоГемА, log₂	210	6,99±0,08	79	6,76±0,12
АутоЛейкА, log₂	136	6,59±0,09	59	6,35±0,15

Примечание. * -р<0,05, **-р<0,01, *** -р<0,01

Содержание аутоантител к двухспиральной ДНК 56,64±0,84МЕ/мл, нуклеопротеидам 1,09±0,05МЕ/мл у пожилых достоверно выше, чем в возрастной группе 20-49 лет 53,92±0,70 и 0,95±0,04 МЕ/мл соответственно (р<0,05). Частота выявления аномально высоких концентраций всех исследуемых аутоантител у больных в возрастных группах колеблется от 47,15% при обнаружении аутоантител к нуклеопротеидам в возрастной группе 20-49 лет, до 87,62% аутогемагглютининов в той же подгруппе.

Рис. 9. Частота выявления аномально высоких уровней исследуемых

аутоантител в возрастных группах больных вне зависимости от патологии.

1-ААТ к ds-DNA, 2- ААТ к нуклеопротеидам, 3- ААТ к тромбоцитам,

4- Аутогемагглютинины, 5- Аутолейкоагглютинины

При сравнении возрастных групп больных, у пожилых достоверно чаще регистрируются аномальные концентрации антител к двухспиральной ДНК -87,0% против 75% у молодых, (х²⁼5,15; р<0,05).

Таблица 18

Среднее содержание и частота регистрации аномально высоких концентраций исследуемых аутоантител в зависимости от пола, п=560


Аутоантитела	M±m		Частота повышенных уровней(%)
Аутоантитела
женщины	мужчины	женщины	мужчины
Анти ds-DNA, МЕ/мл	54,83±0,73	55,0±0,92	76,85	84,71
ААТк нуклеопротеидам, МЕ/мл	0,96±0,04	1,11*0,06	49,23	57,81
ААТ к тромбоцитам log₂	5,52±0,07	5,89±0,П	62,79	75,0
АутоГемА, log₂	6,79±0,07	6,66±0,12	83,27	77,5
АутоЛейкА, log₂	6,50±0,08	6,25±0,14	76,44	70,27

Анализ содержания

Патологические состояния	кол-во	М±т	М±б	Частота регистрации повышенных уровней ААТ(%)
Аутоиммунная патология	117	56,19±0,87	56,19±9,58	85,47
Хронические воспалительные заболевания	61	52,62±1,23	52,62±9,61	67,21
Аллергические заболевания	24	59,03±1,67	59,03±8.2	91,67
Хроническая вирусная инфекция	25	54,88±1,79	54,88±8,97	72,00
Неопластический процесс	68	53,04±1,05	53,04±8,65	74,63
Доброкачественные новообразования	42	53,8Ш,22	53,81±7,90	71,43
Злокачественные новообразования	26	52,73±1,85	52,73±9,45	80,77
Острая хирургическая патология	39	53,95±1,34	53,95±8,37	79,49

патологических состояниях

исследуемых аутоантител при различных выявляет значительное повышение средних

показателей, по - сравнению с практически здоровыми (р<0,001). Наиболее высокий средний уровень аутоантител к ds-DNA - 59,03±1,67МЕ/мл и частота аномальных концентраций - 91,67% регистрируется при аллергических заболеваниях, максимальный уровень, зарегистрированный в данном исследовании - 84 МЕ/мл. При аутоиммунной патологии средний уровень аутоантител к ds-DNA составляет - 56,19±0,87МЕ/мл, концентрации выше 50МЕ/мл отмечаются в 85,47% случаях, максимальный уровень - 94МЕ/мл. Среднее содержание аутоантител к ds- DNA при хронических воспалительных заболеваниях несколько ниже - 52,62±1,23МЕ/мл, в том числе и вирусной -54,88±1,79МЕ/мл, онкопатологии - 53,04±1,05МЕ/мл, острой хирургической патологии - 53,95±1,34МЕ/мл.

Рис.10. Частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам при различных патологических

состояниях.

1-Аутоиммунная патология, 2- Хронические воспалительные заболевания,

З-Аллергические заболевания, 4- Хроническая вирусная инфекция,

5- Онкологические заболевания, 6- Доброкачественная онкология,

7- злокачественные новообразования, 8- острая хирургическая патология

При злокачественных новообразованиях и у хирургических больных в послеоперационном периоде наиболее часто регистрируются аномальные концентрации (80,77% и 79,49%). При сравнительном анализе с использованием непараметрического теста для множественного сравнения

(Крускал-Валлис тест) содержания аутоантител к ds-DNA между группами больных, получена достоверность различия (Chi-Square - 14,88, df-6, sig.<O,O5). Аномально высокие концентрации аутоантител к двухспиральной ДНК при хронических воспалительных заболеваниях регистрируются достоверно реже (67,21%), чем при аутоиммунной патологии (85,47%, х²-8,12, р<0,01) и аллергических заболеваниях (91,67%, х²~5,37; р<0,05), а также при аутоиммунной патологии (85,47%) чаще, чем при доброкачественных новообразованиях (71,43%, Х²⁼⁼⁸Д2; р<0,01).

Таблица 20

Содержание аутоантител к нуклеопротеидам у практически здоровых и при отдельных патологических состояниях, (МЕ/мл)

Патологические состояния	кол-во	М±т	М±б	Частота повышенных уровней ААТ(%)
Аутоиммунная патология	72	1,04±0,05	1,04±0,42	54,17
Хронические воспалительные заболевания	31	1,10±0,09	1,10±0,18	51,61
Аллергические заболевания	24	0,99±0,10	0,99±0,49	50,00
Хроническая вирусная инфекция	12	0,92±0,15	0,92±0,51	41,67
Неопластический процесс	42	0,90±0,09	0,90±0,57	40,48
Доброкачественные новообразования	27	0,86±0,11	0,86±0,59	37,01
Злокачественные новообразования	15	1,ОЗ±О,15	1,03±0,59	53,33
Острая хирургическая патология	35	1,12±0,06	1,12±0,36	62,86
Практически здоровые	77	0,59±0,04	0,5900,35	10,96

Частота выявления аутоантител к нуклеопротеидам в концентрации выше 1 МЕ/мл у больных в зависимости от патологии колеблется от 37,04% у больных с доброкачественной онкологической патологией до 62,86% у

хирургических больных в послеоперационном периоде. Ожидаемые высокие концентрации аутоантител при аутоиммунной патологии оказались приблизительно в одном ряду со злокачественными новообразованиями, хроническими воспалительными, аллергическими заболеваниями (54,17 --53,33 - 51,61 - 50,0% соответственно). При сравнении частоты регистрации аномальных концентраций аутоантител при выделенных патологических состояниях, выявлено, что у пациентов в раннем послеоперационном периоде достоверно чаще определяются повышенные уровни аутоантител к нуклеопротеидам (62,86%), чем у пациентов с доброкачественными онкологическими заболеваниями (37,04%, % =4,07, р<0,05). Средние уровни аутоантител к нуклеопротеидам в концентрации выше 1,0 МЕ/мл регистрируются при аутоиммунной патологии (1,04±0,05МЕ/мл), злокачественных новообразованиях (1,03±0,15МЕ/мл), хронических воспалительных заболеваниях ираннем послеоперационном периоде. У последних отмечается и самый высокий средний уровень содержания -1,12±0,06 МЕ/мл и 1,10±0,09 МЕ/мл соответственно. Максимальный уровень концентрации 2,48МЕ/мл зарегистрирован также у больных с хроническими воспалительными заболеваниями. У больных со злокачественными новообразованиями и аутоиммунной патологией уровень аутоантител к нуклеопротеидам несколько ниже - 1,04±0,05МЕ/мл и 1,03±0,15МЕ/мл, соответственно. Обращает внимание тот факт, что при ряде патологических состояний средние концентрации аутоантител не превышают уровень физиологической нормы (аллергические заболевания, хронические вирусные инфекции, доброкачественная онкологическая патология), но содержание их выше, чем у практически здоровых (р<0,001). При использовании непараметрического теста для множественного сравнения (Крускал-Валлис тест) содержания аутоантител к нуклеопротеидам между группами больных, достоверного различия не получено (Chi-Square - 7,599, df-6, sig> 0,05).

Реже всего регистрируемые у практически здоровых лиц аутоантитела к тромбоцитам - 7,94%, при патологии обнаруживаются значительно чаще - от

54,79% у онкологических больных до 88,89% у хирургических больных, хотя в соотношении с другими аутоантителами к антигенам клеточной поверхности доля их участия несколько меньше. Наибольшее содержание аутоантител к тромбоцитам отмечается у оперированных больных -6,44±0,391og2, несколько меньше при аутоиммунной патологии и хронических воспалительных заболеваниях (5,87±0,1 Ilog2 и 5,81±0,141og₂ соответственно). Пределы колебаний разведений имеют размах от 1/5 (3,331og₂) до l/160(8,331og₂). При множественном сравнении содержания аутоантител к тромбоцитам выявлены достоверные различия между исследуемыми патологическими группами (Chi-Sq.-15,964, df-6, sig.<0,01).

Таблица 21

Содержание и частота регистрации повышенных уровней аутоантител к

тромбоцитам у практически здоровых и больных при отдельных

патологических состояниях, (log₂)

Патологические состояния	кол-во	М±т	М±б	Частота повышенных уровней(%)
Аутоиммунная патология	121	5,87±0,11	5,87±1,23	76,03
Хронические воспалительные заболевания	67	5,81±0,14	5,81±1,17	70,15
Аллергические заболевания	62	5,62±0,13	5,62±1,03	75,81
Хроническая вирусная инфекция	46	5,48±0,19	5,48±1,30	63,04
Неопластический процесс	73	5,30±0,15	5,ЗО±1,ЗО	54,79
Доброкачественные новообразования	38	5,17±0,20	5,17±1,22	55,26
Злокачественные новообразования	35	5,42±0,22	5,42±1,31	57,17
Острая хирургическая патология	9	6,44±0,39	6,44±1Д7	88,89
Практически здоровые	72	3,96±0,10	3,96±0,83	7,94

Повышенные концентрации аутоантител к тромбоцитам у пациентов с онкологической патологией (как доброкачественной, так и злокачественной) регистрируются достоверно реже (54,79%), чем у больных с аллергическими заболеваниями (75,81%, %²=6,46, p<0,05), аутоиммунной патологией (76,03%, ^²=9,44,р<0,01) и у пациентов в раннем послеоперационном периоде (88,89%, Х²=3,84,р<0,05).

Н ААТ к тромбоцитам ■ Аутогемагглютинины □ Аутолейкоагглютинины Рис.11. Частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител к антигенам клеточной поверхности при различных патологических состояниях

Частота повышенных титров аутогемагглютининов также значительно выше у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде -90,91%, у больных с аутоиммунной патологией - 97,7%, при хронических воспалительных заболеваниях - 87,3%. Причем достоверно чаще аномальные концентрации аутогемагглютининов регистрируются при аутоиммунной

патологии - 97,7%, чем при онкологической патологии - 85,25% (%²=8,09; р<0,01), доброкачественной (87,5%, х²~5,08; р<0,05), и злокачественной (78,57%, х²⁼И>98; р<0,001), при аллергических заболеваниях - 79,31% (Х²=13,49; р<0,001), хронической вирусной инфекции - 68,57% (х²=22,25; р<0,001), а также чаще при хронической бактериальной инфекции - 87,3%, чем при хронической вирусной - 68,57% (х ⁼5,05; р<0,05). Аналогичные изменения выявляются и при анализе средних величин. Во всех группах больных средний титр превышает разведение 1/40, т.е. среднее содержание аутогемагглютининов выше 6,33 log₂.

Таблица 22

Содержание и частота регистрации повышенных уровней аутогемагглютининов у практически здоровых и больных при отдельных

патологических состояниях, (log₂)

Патологические состояния	кол-во	М±гл	М±б	Частота повышенных уровней (%)
Аутоиммунная патология	87	7,32±0,08	7,32±0,75	97,70
Хронические воспалительные заболевания	63	6,98±0,12	6,98±0,97	87,30
Аллергические заболевания	58	6,57±0,15	6,57±1,16	79,31
Хроническая вирусная инфекция	35	6,47±0,22	6,47±1,31	68,57
Неопластический процесс	61	6,89±0,16	6,89±1,22	85,25
Доброкачественные новообразования	32	7,11±0,23	7,11±1,29	87,50
Злокачественные новообразования	28	6,47±0,22	6,47±1,18	78,57
Острая хирургическая патология	11	7,42±0,28	7,42±0,94	90,91
Практически здоровые	98	4,65±0,13	4,65±1,31	17,65

Лидируют по содержанию данных аутоантител, по-прежнему, оперированные больные - 7,42±0,281og₂, затем следуют больные с аутоиммунной патологией - 7,32±0,081og2. Относительно высокое среднее содержание аутогемагглютининов отмечается при онкологических заболеваниях - 6,89±0,161og₂, причем при доброкачественных новообразованиях средний уровень выше - 7,ll±0,23Iog₂, чем при злокачественных новообразованиях 6,47±0,221og₂.

При множественном сравнении (Крускал-Валлис тест) содержания аутогемагглютининов между группами больных, выявлено достоверное различие (Chi-Sguare -28,361, df-6, sig.<0,001).

Среднее содержание аутолейкоагглютининов и распределение их по патологии аналогично аутогемагглютининам. Средний уровень аутоантител, не превышающий физиологический предел (6,33 log₂), регистрируется, по-прежнему, только у практически здоровых - 4,99±0,211og₂. Различия по уровню концентрации аутолейкоагглютининов в группах больных при исследуемых патологических состояниях, статистически достоверны (Chi-Square - 31,996, df-6, sig.<O,OOl).

Наиболее высокий средний уровень (7,33±0,271og₂) и частота аномальных концентраций (100%) аутолейкоагглютининов выявлен у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде, несколько ниже средний уровень данных аутоантител был у больных с аутоиммунной патологией (7,05±0,121og₂). Относительно высокие концентрации аутолейкоагглютининов отмечаются в общей группе онкологических больных (6,39±0,151og₂), при чем в группе больных с доброкачественными новообразованиями выше (6,59±0,211og₂), чем у больных со злокачественными новообразованиями (6,25±0,181og₂). Обращает внимание, что повышенные титры аутолейкоагглютининов при аутоиммунной патологии определяются достоверно чаще (92,0%), чем при аллергических заболеваниях (53,85%, Х²=17,14; р<0,001), хронической вирусной инфекции (66,67%, х²=8,02; р<0,01),

Аномальные концентрации аутолейкоагглютининов у больных с атопическими заболеваниями (53,85%) регистрируются реже, чем у пациентов с доброкачественными онкологическими заболеваниями (81,48%; х²~5,37, р<0,05), больных с хроническими воспалительными заболеваниями (85%, Х,²=9,06; р<0,01) и у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде (100%, Х²⁼5,98, р<0,05).

Патологические состояния	кол-во	М±т	М±б	Частота повышенных уровней (%)
Аутоиммунная патология	50	7,05±0,12	7,05±0,88	92,00
Хронические воспалительные заболевания	40	6,53±0,14	6,53±0,88	85,00
Аллергические заболевания	39	6,02±0,18	6,02±1,10	53,85
Хроническая вирусная инфекция	27	6,07±0,23	6,07±1,20	66,67
Неопластический процесс	49	б,39±0,15	6,39±1,09	71,43
Доброкачественные новообразования	27	6,59±0,21	б,59±1,09	81,48
Злокачественные новообразования	25	6,25±0,18	6,25±0,91	68,00
Острая хирургическая патология	8	7,33±0,27	7,33±0,76	100
Практически здоровые	35	4,99±0,21	4,99±1,24	32,26

Представляло интерес изучить состояние иммунной системы и сравнить характер изменений некоторых ее показателей у больных вне зависимости от патологии при аномальных концентрациях аутоантител.

Таблица 24

Показатели гемограммы (M±mXlO /л, М±т,%) в анализируемых группах

больных

Показатели	1 группа	2 группа	3 группа
Лейкоциты, х10^у/л	7,68±0,40	7,10±0,23*	7,42±0,35
Лимфоциты, %	33,76±1,29	31,55±0,71	29,78±1,05*
Лимфоциты, х10⁹/л	2,54±0,12	2,28±0,09**	2,20±0,09*
Лимфоциты малые,%	72,23±1,56	71,62±0,68	73,04±0,86
Лимфоциты средние, %	16,66±0,79	20,05±0,52***	18,76±0,61*
Лимфоциты большие, %	9,43±0,51	8,16±0,64***	7,44±0,33**
РБТЛ спонтанная, %	11,04±0,66	8,46±0,39***	8,89±0,39**
РБТЛ с ФГА, %	41,81±1,96	36,17±1,14**	37,57±1,47*
РБТЛ с Кон А %	74,72±2,23	59,26±1,82***	62,62±2,06***
эозинофилы, %	2,42±0,19	2,90±0,27	2,63±0,28
эозинофилы, х10^у/л	0,21 ±0,02	0,21±0,02	0,21±0,03
нейтрофилы, %	56,93±1,31	58,30±0,83	59,97±1,27
нейтрофилы, х10^у/л	4,50±0,29	4,38±0,19	4,92±0,36
Фагоцитарное число	5,68±0,47	7,96±0,29***	7,83±0,45***
Активные фагоциты, %	43,95±2,10	44,98±1,08	44,85±1,48

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001 при сравнении с группой 1

При исследовании показателей гемограммы у больных с аномально высокими концентрациями аутоантител к ds-DNA (2 группа) и аутоантител к DNA и нуклеопротеидам (3 группа), выявлены однонаправленные тенденции, касающиеся снижения содержания лейкоцитов (7,10±0,23 и 7,42±0,35х10⁹/л против 7,68±0,40хЮ⁹/л; р<0,05), абсолютного и относительного количества лимфоцитов (31,55±0,71%, 2,28±0,09хЮ⁹/л; р<0,001 и 29,78±1,05%, 2,20±0,09х10 /л; р<0,01) по - сравнению с больными, концентрация

достоверно ниже в группах больных с аномально высокими уровнями аутоантител (36,17±1,14 - 59,26±1,82% во второй группе и 37,57±1,47%; 62,62±2,06% в третьей группе, по-сравнению с первой группой больных -36,17±1,14 и 74,72±2,23% соответствено (р<0,05 - 0,001).

Частота регистрации дефицита активности РБТЛ, стимулированной ФГА достоверно выше в группе больных с нормальным содержанием аутоантител (80,88% против 61,95% в третьей группе, р<0,01.Частота дефицита активности РБТЛ с конканавалином выше в группах с аномальными концентрациями аутоантител (43,14 и 36,28% против 14,93%; р<0,001).

Рис.13. Частота регистрации повышенных уровней некоторых показателей клеточного иммунитета в анализируемых группах больных.

Существенных различий в средних уровнях содержания эозинофильных лейкоцитов и нейтрофилов не выявлено (р>0,05).

В третьей группе больных значительно чаще регистрируются повышенные концентрации относительного числа нейтрофилов (19,64% против 6,55% во второй группе, р<0,01 и 5,71% - в первой группе, р<0,001) и эозинофилов (11,76%, в первой группе повышения относительного числа эозинофилов не отмечалось, р<0,05).

Процент активных фагоцитирующих клеток оказался низким во всех анализируемых группах. Фагоцитарное число в усредненных результатах достоверно выше в группах больных с аномальными концентрациями аутоантител (7,96±0,29 и 7,83±0,45%), чем у больных с нормальным содержанием аутоантител (5,68±0,47%; р<0,001). Частота регистрации повышенных уровней фагоцитарного числа достоверно выше во второй группе больных (33,94%), чем в первой (17,14%, у?=6,74; р<0,01).

Таблица 25

Показатели моноцитограммы (М±тх10⁹/л, М±т,%) в анализируемых группах

больных

Показатели	1 группа	2 группа	3 группа
Моноциты, %	7,46±0,42	8,03±0,29	8,59±0,39
Моноциты, хЮ⁹/л	0,58±0,04	0,59±0,03	0,64±0,04
промоноциты, %	54,85*1,11	59,07±0,29***	59,23±0,34***
моноциты,%	13,75±О,67	12,77±0,28	12,63±0,33
полиморфноядерные лейкоциты, %	29,65±0,83	28,50±0,39	28,24±0,43
Индекс пролиферации	1,12±0,02	1,18±0,01***	1,19±0,01***
Индекс дифференцировки	0,28±0,01	0,25±0,01	0,25±0,01

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001 при сравнении с группой 1 ^л -р<0,05; ^ллр<0,01;^ллл р<0,001 при сравнении с группой 2

Повышенные показатели относительного числа моноцитов в первой группе составляют 15,49%, во второй - 15,76 и значительно выше в третье группе - 26,32% (р<0,05), однако различий в усредненных значениях не отмечается (р>0,05). При анализе моноцитограммы существенные различия выявляются в структуре моноцитограммы: повышение промоноцитов у больных с аномальными концентрациями аутоантител (59,07±0,29% и 59,23±0,34%,р<0,001) при относительном снижении средних и

полиморфноядерных моноцитов и достоверное повышение индекса пролиферации моноцитов (1,18±0,01 и 1,19±0,01% против 1,12±0,02%, р<0,001).

Таблица 26

Среднее содержание фенотипов лимфоцитов в анализируемых группах

(М±тхЮ⁹/л)

Показатели	1 группа	2 группа	3 группа
CD3+,xlO7n	0,92±0,04	0,91±0,04	0,94±0,04
CD5+,xlO7n	1,00±0,04	0,98±0,04	1,05±0,05
CD4+,xlO7n	0,54±0,04	0,50±0,02	0,52±0,03
СБ8+,х107л	0,70±0,05	0,50±0,03***	0,60±0,04*,^л
CD10+,xl07n	0,33±0,04	0,27±0,04	0,41±0,09
СО25+,хЮ7л	0,68±0,04	0,66±0,05	0,80±0,06
СО71+,х107л	0,65±0,07	0,70±0,05	0,74±0,07
HLADR+,xlO7n	0,87±0,06	0,77±0,04	0,89±0,07
СО16+,х107л	0,56±0,06	0,44±0,03	0,57±0,07
CD95+,xlO7n	0,77±0,08	0,62±0,05	0,82±0,11

Примечание: ***- р<0,001 при сравнении с группой 1; ^л -р<0,05 - при сравнении с группой 2

При сравнении абсолютных уровней фенотипов лимфоцитов в периферической крови исследуемых больных, выявлено, что содержание цитотоксических лимфоцитов выше физиологической нормы, что отражает повышение Т-киллерной активности у больных. Самый высокий уровень СД8+ в группе больных с нормальным содержанием исследуемых аутоантител (0,70±0,05х107л), который достоверно (р<0,001) отличается от группы больных с аномально высокими концентрациями аутоантител к двухспиральной ДНК (0,50±0,03х107л), а также от третьей группы больных с аномально высокими концентрациями обоих аутоантител (0,60±0,04х107л, р<0,05).

88 Обращает внимание, что достоверные различия содержании СД8+

выявляются между группами с повышенным содержанием аутоантител (р<0,05). Кроме того, в первой группе достоверно чаще регистрируются повышенные уровни цитотоксических лимфоцитов (75,36%), чем в группах с аномальными концентрациями аутоантител (48,45 и 58,12% соответственно, р<0,001). Частота регистрации повышенных уровней фенотипов лимфоцитов СД16+ в третьей группе больных (19,12%), достоверно выше, чем во второй группе (7,69%,х²=5,36; р<0,05).

Таблица 27

Сравнение показателей гуморального иммунитета в анализируемых группах

больных (M±mxlO%, М±т,%)

Показатели	1 группа	2 группа	3 группа
СД22+,хЮ7л	0,52±0,03	0,53±0,04	0,52±0,05
IgM, г/л	2,06±0,08	2,11±0,05	2,19±0,04^АА
IgG, г/л	15,40±0,42	16,67±0,28*	16,31±0,34
IgA, г/л	0,88±0,09	0,95±0,08	1,07±0,12
IgE, МЕ/мл	56,98±5,09	93,87±5,16***	103,42±5,58***
ЦИК средние, г/л	3,88±0,20	3,93±0,15	4,38±0,22^А
ЦИК крупные, г/л	2,62±0,17	3,19±0,14*	3,88±0,22***,^А
ААТ к тромбоцитам, Iog2	6,05±0,19	5,69±0Д5	5,76±0,14
АутоГемА, Iog2	6,94±0,14	7,31±0,15	7,39±0,18
АутоЛейкоА, Iog2	6,66±0,14	6,74±0,17	6,72±0,29
ААТ к RNP, МЕ/мл	0,51±0,03	0,61±0,02***	1,41±0,02***,^ллл
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	41,21±0,80	57,51 ±0,47***	60,38±0,65***,^АЛЛ

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001 при сравнении с группой 1 ^л -р<0,05; ^лл р<0,01;^ллл р<0,001 при сравнении с группой 2

Существенных различий в средних уровнях содержания антителообразующих клеток, фенотипируемых как СД22+ у больных в разных группах не выявлено (р>0,05).

Уровни IgM во всех группах выше физиологического предела и имеют тенденцию к повышению концентрации во второй и третьей группах с аномально высокими уровнями аутоантител, между которыми выявляется достоверное различие в содержании данного иммуноглобулина (2,11±0,05г/л и 2,19±0,04г/л, р<0,01). Повышенные уровни IgM также чаще регистрируются в третьей группе (86,49%), чем во второй (81,65%; Х²⁼6,79; р<0,01).

Средняя концентрация сывороточного иммуноглобулина IgG во всех группах соответствует физиологическим границам, в рамках которых выявлена тенденция к повышению IgG в группах с аномально высокими концентрациями аутоантител (15,40±0,42г/л у больных первой группы и 16,67±0,28г/л у больных во второй группе, р<0,05). Концентрация IgA во всех группах ниже физиологического уровня и не имеет значимых различий при сравнении анализируемых групп больных.

Выраженные различия между группами обнаружены при сопоставлении концентраций IgE. Наиболее высокое содержание IgE отмечается в группе больных с аномальными концентрациями обоих исследуемых аутоантител (104,20±5,26МЕ/мл) и значительно отличается от содержания данного иммуноглобулина в первой группе (56,98±5,09МЕ/мл, р<0,001). Во второй группе больных с аномально высокими концентрациями аутоантител к ds-DNA содержание IgE (93,87±5,16МЕ/мл) также достоверно выше, чем в первой группе (р<0,001).

Аналогичные изменения отмечаются при сравнении частоты регистрации повышенных концентраций IgE. В группе больных с аномальными концентрациями обоих исследуемых аутоантител в 58,90% случаев отмечаются повышенные уровни IgE, значительно чаще, чем во второй группе (41,54%; р<0,05) и первой группе с нормальным содержанием исследуемых аутоантител (10,64%; р<0,001).

Рис.14. Частота регистрации некоторых показателей гуморального иммунитета в анализируемых группах больных.

У всех больных, вне зависимости от уровня содержания аутоантител, регистрируются токсические концентрации ЦИК (выше 2,0г/л). Выявлена достоверная тенденция к повышению уровней концентраций ЦИК в группах с аномальным содержанием исследуемых аутоантител (табл.27), причем самый высокий уровень ЦИК отмечен у больных с сочетанным содержанием аномальных концентраций аутоантител к нуклеопротеидам и ds-DNA (4,38±0,22г/л и 3,88±0,22г/л). В первой группе у 60,87% больных отмечаются токсические концентрации ЦИК, достоверно выше во второй - 75% (%²=4,69; р<0,05) и третьей группе - 77,78% (х²=6,09; р<0,05).

При изучении содержания аутоантител к антигенам клеточной поверхности выявлено, что концентрации всех исследуемых аутоантител (аутоантител к тромбоцитам, аутогемагглютининов, аутолейкоагглютининов) выше физиологических границ, но существенных различий в содержании между анализируемыми группами нет (р>0,05). Содержание аутоантител к двухспиральной ДНК и аутоантител к нуклеопротеидам в третьей группе больных достоверно выше (60,38±0,65 и 1,41±0,02г/л), чем во второй (57,51±0,47 и 0,61±0,02 г/л) и первой (41,21±0,80г/л и 0,51±0,03 г/л, р<0,001), а

91 частота регистрации аномальных концентраций различаются во всех

анализируемых группах (р<0,001).

Таблица 28

Среднее содержание белков и некоторых цитокинов у больных с различными уровнями исследуемых аутоантител (М±т)

Показатели	1 группа	2 группа	3 группа
Трансферрин, г/л	4,28±0,26	4,49±0,07	4,62±0,11^А
Церулоплазмин, г/л	0,09±0,01	0,11±0,04	0,09±0,05
Пропердин-В, г/л	0,49±0,16	0,60±0,07	0,53±0,07
РЭА, нг/мл	2,29±0,48	2,44±0,14**	3,16±0,37**
Комлемент СЗ, г/л	1,41±0,15	1,41±0,07	1,55±0,07
Комплемент С4, г/л	0,88±0,13	0,87±0,04	0,98±0,05
IL-1, нг/мл	0,86±0,20	1,00±0,13	1,55±0,24
IL-2, нг/мл	0,81±0,11	0,78±0,11	0,73±0,07
TNF-a, нг/мл	0,87±0,10	0,87±0,05	0,89±0,04

Примечание: **-р<0,01 - при сравнении с группой 1; ^А -р<0,05 - при сравнении с группой 2

При сравнении средних концентраций транспортных белков в анализируемых группах, отмечается тенденция к повышению уровней концентрации трансферрина, церулоплазмина и пропердина в группах с аномально высокими концентрациями аутоантител, однако достоверные различия выявлены только при сравнении среднего содержания трансферрина в группах с аномальными концентрациями аутоантител (4,49±0,07 и 4,62±0,11 г/л, р<0,05), а также частоты повышенных уровней между первой - 64,52% и во второй группами- 85,61% (р<0,01).

Значимые различия между анализируемыми группами выявлены при сопоставлении концентраций раково-эмбрионального антигена. Уровень РЭА у больных с нормальным содержанием аутоантител составляет 2,29±0,48нг/мл и достоверно (р<0,01) отличается от группы больных с аномальными концентрациями аутоантител к ds-DNA (2,44±0,14нг/мл) и группы больных с

аномальными концентрациями аутоантител к нуклеопротеидам и ds-DNA, у которых регистрируется и самый высокий уровень РЭА - 3,16±0,37нг/мл.

Средняя концентрация белков системы комплемента СЗ и С4 у больных в анализируемых группах без существенных различий (р>0,05), однако достоверно имеет место диспротеинемия, обусловленная снижением компонента СЗ ниже физиологической нормы и повышением компонента С4 выше физиологической границы, которая более выражена у больных с аномальными концентрациями исследуемых аутоантител. В первой группе больных с нормальным содержанием аутоантител в 70% случаев регистрируется повышенное содержание компонента С4, значительно чаще в группах с аномальными концентрациями аутоантител - 93,55% и 94,59% соответственно, (р<0,01).

Средние концентрации исследуемых цитокинов (IL-1, IL-2, TNF-a) во всех анализируемых группах выше физиологического предела. Выявлена тенденция к повышению концентрации исследуемых цитокинов группах с аномальным содержанием исследуемых аутоантител. Следует отметить, что повышенные концентрации TNF-a в первой группе регистрируются у 69,05% больных и значительно чаще во второй (86,62%, у^—6,91; р<0,01) и третьей группе сочетанным содержанием аномальных концентраций аутоантител к нуклеопротеидам и ds-DNA (88,68%, х²⁼8,26; р<0,01).

Таким образом, установлено, что частота регистрации аномально высоких концентраций исследуемых аутоантител у больных достоверно выше, чем у практически здоровых лиц (р<0,001). Чаще регистрируется повышение аутогемагглютининов (86,52%), аутоантител к двухспиральной ДНК (78,42%), аутолейкоагглютининов (77,06%), аутоантител к тромбоцитам (71,24%), у половины обследованных больных - аутоантитела к нуклеопротеидам (50,85%).

Среднее содержание исследуемых аутоантител у больных выше физиологических пределов и значительно отличаются от средних уровней аутоантител у практически здоровых лиц (р<0,001). При этом размах

колебаний определяемых аутоантител у больных и практически здоровых достоверно не отличается.

У пожилых достоверно чаще регистрируются аномальные концентрации антител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам.

Достоверных различий в содержании исследуемых аутоантител у больных по полу, в наших исследованиях не установлено (р>0,05).

Проведенные исследования позволили установить характер и тип аутосенсибилизации в зависимости от нозологии. Анализ содержания исследуемых аутоантител при различных патологических состояниях выявляет значительное повышение средних показателей, по - сравнению с практически здоровыми (р<0,001). Обращает на себя внимание большая вариабельность показателей. Частота регистрации аномальных концентраций аутоантител значительно выше, чем у практически здоровых (р<0,001) и колеблется от 37,04% при обнаружении аутоантител к нуклеопротеидам у больных с доброкачественными новообразованиями, до 100% при обнаружении аутолейкоагглютининов у хирургических больных в раннем послеоперационном периоде.

Наиболее часто аномальные концентрации исследуемых аутоантител выявляются у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде, у больных с аутоиммунной патологией, аллергическими заболеваниями и злокачественными новообразованиями.

Повышение аутоантител у больных и здоровых сопряжено с рядом аналогичных изменений в иммунной системе. Аутосенсибилизация формируется на фоне подавления процессов активизации (CD5+,CD3+, HLADR+) и дифференцировки (CD8+,CD16+,CD95+) иммуннокомпетентных клеток. Кроме того, у больных с аномально высокими концентрациями аутоантител достоверно чаше регистрируются повышенные концентрации IgM и IgG, а также достоверно чаще выявляются повышенные концентрации провоспалительных цитокинов IL-2, TNF-a, а также компонента комплемента

С4. Достоверность различий увеличивается в группе с повышенным содержанием аутоантител к ds-DNA и нуклеопротеидам.

3.3 Взаимосвязи исследуемых аутоантител с иммунологическими показателями периферической крови

Выявленные корреляционные связи между содержанием аутоантител и

исследуемыми параметрами иммунитета у практически здоровых

представлены в приложении 1.

Установлена прямая корреляционная связь возраста с уровнем

содержания аутоантител к двухспиральной ДНК (п=112, г=0,23; р<0,01).

Получена линейная регрессионная модель зависимости содержания уровня

аутоантител к ds-DNA от возраста:

ААТ к ds-DNA = 34,07 + 0,23 х возраст (R²=0,227, p<0,01)

Определили, что у исследуемых практически здоровых людей фактор

возраста оказывает влияние на содержание аутоантител к двухспиральной

ДНК(11²=0,227,р<0,01).

не является независимым фактором, влияющим на содержание аутоантител (р>0,2).

Определили зависимость содержания исследуемых аутоантител от сезона. При факторном анализе выявлено, что сезон является независимым фактором, влияющим на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК (R²=0,136, (Adjusted R²=0,128) p<0,001), аутоантител к тромбоцитам (R²=0,079, (Adjusted R²=0,066) p<0,01), аутогемагглютининов (R²=0,025, (Adjusted R²=0,013) p<0,05).

Представляло интерес выявить взаимосвязи между содержанием аутоантител с исследуемыми показателями иммунитета у практически здоровых людей (см. приложение 1).

Корреляционный анализ между концентрацией аутоантител к двухспиральной ДНК и показателями гемограммы выявил положительные взаимосвязи между содержанием аутоантител к ds-DNA и индексом пролиферации моноцитов (г=0,35; р<0,001), а также содержанием промоноцитов в структуре моноцитограммы (г=0,26; р<0,01).

Отрицательные корреляционные связи регистрируются с абсолютным содержанием лейкоцитов (г=-0,32; р<0,01), абсолютным содержанием лимфоцитов (г=-0,35, р<0,001), нейтрофилов (г=-0,22; р<0,05), спонтанной (г=-0,23, р<0,05) и стимулированной РБТЛ с ФГА (г=-0,37; р<0,001), с конканавалином (г=-0,34; р<0,001) и полиморфноядерными моноцитами (г=-0,23;р<0,001).

Аутоантитела к нуклеопротеидам имеют меньше взаимосвязей с показателями гемограммы (табл.29). Отрицательные корреляционные взаимосвязи регистрируются с абсолютным и относительным содержанием лимфоцитами (г=-0,25*; р<0,05 и г=-0,28; р<0,01), (г=-0,29; р<0,01), средними лимфоцитами в структуре лимфоцитограммы (г=-0,23; р<0,05). Положительная корреляционная взаимосвязь установлена между аутоантителами к нуклеопротеидам и относительным содержанием нейтрофилов (г=0,27; р<0,05).

Таблица 29

Корреляционные взаимосвязи уровней аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с показателями гемограммы у практически здоровых людей


Показатели	ААТ к ds-DNA		ААТ к нуклеопротеидам
Показатели
п	г	п	^г
лейкоциты, х10⁹/л	106	-0,32***	68	-0,15
лимфоциты, %	106	-0,25	77	-0,25*
лимфоциты, х10⁹/л	112	-0,35***	77	-0,28**
средние лимфоциты, %	106	-0,22	74	-0,23*
РБТЛ спонтанная,%	109	-0,23*	70	-0,12
РБТЛ с ФГА, %	107	-0,37***	69	-0,09
РБТЛ с КонА,%	107	-0,34***	69	0,03
Моноцитограмма, %:
промоноциты	109	0,26**	70	0,17
полиморфноядерные	109	-0,23***	63	-0,25
Индекс пролиферации	105	0,35***	66	0,20
нейтрофилы, %	111	0,21	76	0,27*
нейтрофилы, хЮ /л	111	-0,22*	76	0,09

Примечание: *- р<0,05; **- р<0,01; ***- р<0,001

Корреляционный анализ между содержанием аутоантител к двухспиральной ДНК и некоторыми фенотипами лимфоцитов в нашем исследовании выявил значительную обратную взаимосвязь со всеми исследуемыми фенотипами (табл.30).

Наибольшая обратная взаимосвязь регистрируется между содержанием аутоантител к ds-DNA и CD10+(r=-0,49, p<0,001), CD3+ и CD5+ (г=0,44-0,43, р<0,001), CD16+(r=0,43, p<0,001), CD8+ (г=0,40, р<0,001).

Аутоантитела к нуклеопротеидам имеют отрицательные взаимосвязи с абсолютным содержанием Т-лимфоцитов с маркерами СД10+ (г=-0,36; р<0,01).

Таблица 30

Корреляционные взаимосвязи уровней аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с некоторыми фенотипами лимфоцитов у практически

здоровых людей


Показатели	ААТ к ds-DNA		ААТ к нуклеопротеидам
Показатели
п	г	п	г
CD3+,xlO7n	111	_п 44***	72	-0,22
CD5+,xlO7n	111	-0,43***	73	-0,18
СО4+,хЮ7л	112	-0,31***	73	-0,13
СО8+,х107л	103	-0,40***	68	-0,28
СО10+,хЮ7л	55	-0,49***	53	-0,36**
CD25+, хЮ7л	80	-0,31**	72	-0,16
CDHLADR+, хЮ7л	107	-0,36***	70	-0,04
СБ16+,хЮ7л	105	-0,43***	67	-0,06
СБ95+,хЮ7л	76	-0,26*	73	-0,16

Примечание: *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001

Проведен корреляционный анализ содержания аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с показателями гуморального иммунитета, провоспалительными цитокинами и белками плазмы.

В нашем исследовании установлены значимые положительные корреляционные связи между содержанием анализируемых аутоантител (к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам) и содержанием раково-эмбрионального антигена (г=0,49-0,40; р<0,001), циркулирующих иммунных комплексов (г=0,35-0,36; р<0,001 и г=0,20; р<0,05), трансферрина (г=0,36; р<0,001 и r=0,26; p<0,05), IgE (г=0,38; р<0,001, г=0,40; р<0,01) и отрицательная взаимосвязь с В-лимфоцитами (г=-0,31 и г=-0,29; р<0,01). Кроме того, регистрируется значимая положительная связь между содержанием аутоантител к нуклеопротеидам и аутолейкоагглютининов (r=0,61; p<0,001), a также между содержанием аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам (г=0,56; р<0,001).

Таблица 31

Корреляционные взаимосвязи уровней аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с некоторыми показателями гуморального иммунитета у

практически здоровых людей


Показатели	ААТ к ds-DNA		ААТ к нуклеопротеидам
Показатели
п	г	п	г
CD22+, х107л	102	-0,31**	70	-0,29**
Трансферрин, г/л	103	0,36***	73	0,26*
РЭА, нг/мл	99	0_?49***	64	0,40***
IgE, г/л	107	0,38***	68	0,40**
ЦИК средние, г/л	111	0,36***	72	0,08*
ЦИК крупные, г/л	111	0,35***	72	0,20*
АутоЛейкА Iog2	25	0,26	29	0,61***
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл			75	0,56***

Примечание: *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001

Корреляционных взаимосвязей между исследуемыми аутоантителами и цитокинами (IL-1, IL-2,TNF-a) у практически здоровых в нашем исследовании не выявлено.

Проведен корреляционный анализ между содержанием аутоантител к антигенам клеточной поверхности с исследуемыми показателями иммунитета.

Установлены положительные корреляционные взаимосвязи между аутоантителами к тромбоцитам и промоноцитами (г=0,54; р<0,001), полиморфноядерными (г=0,29; р<0,01), трансферрином (г=0,39,р<0,001), провоспалительными цитокинами IL-2 (r=0,42; p<0,01), TNF-a (r=0,35; р<0,01), РЭА (г=0,24; р<0,05), аутогемагглютининами (г=0,35; р<0,001) и обратная связь с индексом дифференцировки (г=-0,26; р<0,05).

Многофакторный анализ выявил наиболее значимые параметры, влияющие на содержание аутоантител к тромбоцитам: аутогемагглютинины (р<0,001), абсолютное количество лейкоцитов (р<0,05), лимфоцитов (р<0,05),

относительное число эозинофилов (р<0,05), РЭА (р<0,01) и крупные ЦИК (R²=0,801 (Adjusted R²=0,750), p<0,001).

Положительные коэффициенты ранговой корреляции установлены между содержанием аутогемагглютининов и спонтанной РБТЛ (г=0,252; р<0,05), полиморфноядерными моноцитами (г=0,367; р<0,001), аутолейкоагтлютининами (г=0,468; р<0,01), аутоантителами к тромбоцитам (г=0,297; р<0,001).

Отрицательные взаимосвязи определяются между содержанием аутогемагглютининов и фенотипами лимфоцитов СД25+

(г=-0,276, р<0,05), моноцитами в составе моноцитограммы (г=-0,311; р<0,001), индексом дифференцировки (r=-0,232; p<0,05), IgA (r=-0,326; p<0,001), a также церулоплазмином (г=-0,742; р<0,001). Причем достоверных различий при сравнении коэффициентов корреляции между содержанием аутоантител к тромбоцитам и аутогемаглютининов с индексом дифференцировки и полимофноядерными моноцитами не выявлено (р<0,05).

Методом факторного анализа установили, что на содержание аутогемагглютининов оказывают влияние совокупность факторов: трансферрин (р<0,01), церулоплазмин (р=0,017), большие лимфоциты (р<0,05), IgE (p<0,05) (R²=0,868 (Adjusted R²=0₅828), p<0,001).

Аутолейкоагглютинины имеют положительные корреляционные взаимосвязи с аутогемагглютининами (г=0,468; р<0,01) и аутоантителами к нуклеопротеидам (г=0,607; р<0,001), отрицательные взаимосвязи с СД10+ (г=-0,830;р<0,01).

Методом многофакторного анализа также установлено, что совокупность таких факторов, как аутоантитела к нуклеопротеидам (р<0,001), относительное число эозинофилов (р<0,05), спонтанная РБТЛ (р<0,01) и промоноциты (р<0,05), оказывают значительное влияние на содержание аутолейкоагтлютининов (R²=0,969 (Adjusted R²=0,945), p<0,001).

100

Таблица 32

Непараметрические корреляции содержания аутоантител к двухспиральной ДНК у практически здоровых в анализируемых возрастных группах


Показатели	20-49 лет		50-75 лет
Показатели
п	г	п	г
лейкоциты, х107л	34	-0,08	72	-0,357**
лимфоциты, хЮ /л	39	-0,18	73	-0,416***
большие лимфоциты,%	39	-0,05	69	-0,262*
РБТЛ с ФГА,%	39	-0,01	68	-0,503***
РБТЛ с КонА,%	39	-0,08	68	-0,415***
промоноциты,%	39	0,26	70	0,255*
CD3+,xlO7n	38	-0,194	73	-0,522***
CD5+,xl07n	39	-0,233	72	-0,495***
СБ4+,хЮ7л	39	-0,185	73	-0,367***
СЭ8+,х107л	33	-0,211	70	-0,445***
CD10+,xl07n	6	-0,695	49	-0,457***
CD22+,xlO7n	32	-0,021	70	-0,340**
CD25+,xlO7n	23	-0,054	57	-0,361**
СД16+,хЮ7л	34	-0,342*	71	-0,402***
HLADR+,xlO7n	35	-0,05	72	-0,406***
СО95+,х107л	22	0,124	54	-0,314*
IgG.r/л	39	-0,343*	69	-0,02
IgA,r/ii	39	-0,335*	70	-0,132
IgE, МЕ/мл	37	0,22	70	0,323**
трансферрин, г/л	36	0,27	67	0,386***
РЭА, нг/мл	31	0,23	68	0,442***
ЦИК крупные, г/л	39	0,403**	72	0,334**
ААТ к RNP, МЕ/мл	21	0,102	54	0,566**

Примечание: *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001

101

Поскольку фактор возраста оказывает влияние на содержание аутоантител и содержание аутоантител к двухспиральной ДНК в возрастных группах имело достоверные отличия, проведен корреляционный анализ между содержанием аутоантител к ds-DNA и исследуемыми показателями иммунитета в анализируемых возрастных группах 20-49 лет и 50-75 лет (табл.32).

Обращает внимание тот факт, что достоверные корреляционные взаимосвязи в возрастной группе 50-75 лет обнаружили себя по тем же показателям, что и общая группа практически здоровых. В возрастной группе 20-49 лет корреляционных взаимосвязей немного, определяются обратные корреляционные взаимосвязи с IgG (r=-0,323; р<0,05) и IgA (r=-0,335; р<0,05). В старшей возрастной группе появляются достоверные отрицательные корреляционные связи с показателями клеточного иммунитета лейкоцитами, лимфоцитами, РБТЛ, со всеми исследуемыми ^фенотипами лимфоцитов, положительные связи с показателями гуморального иммунитета: IgE (r=0,323, р<0,01), ЦИК(г=0,334; р<0,01), трансферрином (г=0,386; р<0,001), РЭА(г=0,442; р<0,001), а также с аутоантителами к нуклеопротеидам (г=0,566; р<0,001). Сравнительный анализ корреляционных взаимосвязей в возрастных группах показал, что в обеих группах значимы связи с содержанием естественных киллеров СД16+ и ЦИК.

При сравнении коэффициентов корреляции данных групп практически здоровых лиц, статистически значимых различий не выявлено (р>0,05). Установлены факторы, достоверно и значимо влияющие на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК в возрастной группе 20-49 лет: индекс дифференцировки, СД16+, аутоантитела к нуклеопротеидам, TNF-a и ЦИК (R²=0,856(Adjusted R²=0,791), p<0,001).

Выявили факторы, влияющие на содержание аутоантиел к ds-DNA в старшей возрастной группе 50-75 лет — аутоантитела к нуклеопротеидам, индекс пролиферации, трансферрин, абсолютное содержание лимфоцитов и

102

относительное количество больших лимфоцитов (R²=0,63 (Adjusted R²=0,583), р<0,001).

Таблица 33

Корреляционные взаимосвязи содержания аутоантител к двухспиральной

ДНК и нуклеопротеидам с показателями гемограммы и некоторыми

фенотипами лимфоцитов у больных


Показатели	ААТ к ds-DNA		ААТ к нуклеопротеидам
Показатели
п	г	п	г
лейкоциты, х107л	295	-0,13*	198	0,04
лимфоциты, %	335	-0,12*	226	-0,09
лимфоциты, х107л	341	-0 19***	232	-0,01
средние лимфоциты, %	296	0,13*	195	0,08
большие лимфоциты, %	296	-0,13*	195	0,03
РБТЛ спонтанная, %	322	-0 19***	217	0,04
РБТЛ с ФГА, %	321	-0,18***	216	-0,02
РБТЛ с КонА, %	318	-0,26***	213	0,02
Моноциты, х107л	336	0,001	228	0,18**
Моноциты, %	332	0,07	224	0,17**
промоноциты,%	331	0,16***	223	0,17
Индекс пролиферации	326	0,14**	220	0,19**
Фагоцитарное число	328	0,27***	223	0,04
CD3+,xlO7n	335	-0,12*	229	0,05
CD5+,xlO7n	334	-0,14**	229	0,07
CD8+,xlO7n	330	-0,24***	225	0,06
СО10+,хЮ7л	63	-0,26*	61	-0,17
HLADR+.xK^to	262	-0,18**	180	0,03
CD16+,xlO7n	216	-0,19**	144	-0,06

Примечание: *- р<0,05; **- р<0,01; ***- р<0,001

103

Представляет интерес корреляционный анализ взаимосвязей между содержанием аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с изучаемыми показателями иммунитета у больных вне зависимости от патологии, а также возможности сопоставления полученных связей с характером взаимосвязей у практически здоровых (см. приложение 2).

Корреляционный анализ между содержанием аутоантител и показателями гемограммы у больных выявил положительные взаимосвязи со средними лимфоцитами (г=0,13; р<0,05), содержанием промоноцитов (г=0,16; р<0,001), индексом пролиферации (г=0,14; р<0,01) и фагоцитарным числом (г=0,27; р<0,001). Отрицательные связи зарегистрированы с абсолютным содержанием лейкоцитов(г=-0,13, р<0,05), абсолютным и относительным содержанием лимфоцитов (г=-0,12; р<0,05 и г=-0,19; р<0,001), большими лимфоцитами (г=-0,13; р<0,05), спонтанной (г=-0,19; р<0,001) и стимулированной РБТЛ (г=-0,18 и г=-0,26; р<0,001).

Аутоантитела к нуклеопротеидам коррелируют с абсолютным и относительным содержанием моноцитов (г=0,18-0,17; р<0,01) и индексом пролиферации (г=0,19; р<0,01). Выявлены достоверные отрицательные связи между содержанием аутоантител к двухспиральной ДНК и содержанием CD3+(r=-0,12; р<0,05), CD5+(r=-0,14; p<0,001), CD8+(r=-0,24; р<0,001), CD10+(r=-0,26; p<0,05), HLADR+ (r=-0,18; p<0,01), CD16+(r=-0,19; p<0,01).

Корреляционный анализ между содержанием аутоантител к двухспиральной ДНК и исследуемыми показателями гуморального иммунитета (табл.34) выявил положительные взаимосвязи с IgE (г=0,29; р<0,001), ЦИК (г=0,20; р<0,001), аутогемагглютининами (г=0,25; р<0,01), аутоантителами к нуклеопротеидам (г=0,50; р<0,001).

Положительные корреляционные взаимосвязи регистрируются с РЭА (г=0,23; р<0,001) и исследуемыми белками плазмы: трансферрином (г=0,17; р<0,01), пропердин-фактор-В (г=0,32; р<0,01), гаптоглобином (г=0,66; р<0,01), а-2-макроглобином (г=0,79; р<0,01); с исследуемыми цитокинами - IL-2

104

(г=0,16; р<0,05) и TNF-a (r=0,19; р<0,001). Умеренная обратная связь выявлена с интерферроном-у (г=-0,41; р<0,05).

Таблица 34

Корреляционные взаимосвязи уровней аутоантител к двухспиральной ДНК и нуклеопротеидам с показателями гуморального иммунитета у больных


Показатели	ААТ к ds-DNA		ААТ к нуклеопротеидам
Показатели
п	г	п	г
Трансферрин, г/л	260	0,17**	186	0,21***
РЭА, нг/мл	285	0 23***	184	0,09
IgM, г/л	318	0,01	213	0,16*
IgA, г/л	324	-0,05	217	-0,16*
IgE, г/л	234	0,29***	154	0,26***
IL-2, нг/мл	156	0,16*	112	0,11
TNF-a, нг/мл	273	0,19***	189	0,01
Интерферон -у, пг/мл	27	-0,41*	21	-0,45*
Пропер дин фактор-В, г/л	54	0,32**	43	-0,09
Гаптоглобин, г/л	14	0,66**	9	0,65
a-2-макроглобин, г/л	9	0,79**	6	0,88**
Комплемент С4	155	0,07	125	0,24**
ЦИК крупные, г/л	333	0,20***	292	0,15*
АутоГемА, Iog2	147	0,25**	89	-0,11
ААТ к ds-DNA, МЕ/мл	-	-	229	0,50***

Примечание: *- р<0,05; **- р<0,01; ***- р<0,001

Выявлены положительные корреляционные взаимосвязи между содержанием аутоантител к нуклеопротеидам и IgE (r=0,26; p<0,001), IgM (г=0,16; р<0,05), ЦИК (г=0,15; р<0,05), аутоантителами к ds-DNA (r=0,50; р<0,001), компонентом комплемента С4 (г=0,24; р<0,01), а также с трансферрирном (г=0,21; р<0,001), a-2-макроглобином (г=0,88; р<0,01). Отрицательные взаимосвязи установлены между содержанием аутоантител к

105

нуклеопротеидам и IgA (r=-0,16; р<0,05) и интерфероном -у (г=-0,45, р<0,05).

При проведении корреляционного анализа, отмечено, что между изучаемыми аутоантителами регистрируются прямые положительные корреляционные взаимосвязи.

Наиболее значимыми являются взаимосвязи аутоантител к нуклеопротеидам с аутоантителами к двухспиральной ДНК (г=0,563; р<0,001) и аутолейкоагглютининами (г=0,607; р<0,001), а также взаимосвязь между содержанием аутолейкоагглютининов и аутогемагглютининов (г=0,468; р<0,01), которые представлены в таблице.

Таблица 35

Корреляционные взаимосвязи между исследуемыми аутоантителами в группе

практически здоровых лиц

Аутоантитела	ААТк нуклеопротеидам	ААТк тромбоцитам	АутоГемА	АутоЛейкА
ААТ к ds-DNA	0,563***	0,071	0,158	0,307
ААТк нуклеопротеидам		-0,011	0,174	0,607***
ААТк тромбоцитам			0,368**	0,212
АутоГемА				0,468**

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Методом факторного анализа установили, что при аутоиммунной патологии на уровень содержания аутоантител к двухспиральной ДНК наиболее значимо оказывают влияние содержание аутоантител к нуклеопротеидам, РБТЛ с КонА и IL-2 (R²=0,546 (Adjusted R²=0,505), р<0,001), причем при сочетании данных факторов с некоторыми иммунологическими показателями, информативность и значимость модели возрастает. Так, в сочетании с маркером апоптоза СД95+, коэффициент

106

детерминации R² возрастает до 95,6%, с IgE R²=83,6%, с В лимфоцитами СД22+соответственно - R²=94,3%, при р<0,001. Методом пошагового регрессионного анализа выделены четыре независимых фактора, влияющих на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК при аутоиммунной патологии: аутоантитела к нуклеопротеидам, РБТЛ с копканавалином, относительное содержание моноцитов и IgB (R²=0,546, F= 13,245, р<0,()()1).

На содержание аутоантител к нуклеопротеидам при аутоиммунной патологии значительное влияние оказывают аутоантитела к двухспиральной ДНК, РБТЛ с конканавалином, компонент комплемента СЗ, крупные ЦИК, индекс пролиферации моноцитов, трансферрин и TNF-a (R²=0,648 (Adjusted R²=0,541), F=6,045, p<0,001). Методом пошагового регрессионного анализа установлено два независимых предиктора содержания аутоантител к иуклеопротеидам при аутоиммунной патологии: аутоантитела к двухспиральной ДНК и РБТЛ с конканавалином.

Анализируя влияние исследуемых иммунологических показателей на содержание аутоантител к двухспиральной ДИК при аллергических заболеваниях, выявлено, что основными влияющими факторами являются TNF-a, промоноциты, фагоцитарное число, IgM, IgE (R²=0,82() (Adjusted R²=0,803),p<0,001).

На содержание аутоантител к нуклеопротеидам при аллергических заболеваниях значительное влияние оказывают РБТЛ с конканавалином, компонент комплемента СЗ, относительное содержание эо-.нпюфилои и раково-эмбриональный антиген (R²=0,927 (Adjusted R²=0,868), p<0,001).

При хронических воспалительных заболеваниях (преимущественно бактериально-грибковое инфицирование) на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК оказывают различные сочетания факторов. Значимое влияние на содержание аутоантител к ds-DNA оказывает комбинация следующих факторов: аутоантитела к нуклеопротеидам, большие лимфоциты, РБТЛ с ФГА, 1L-2, лейкоциты и СД71+(1*²=0,905 (Adjusted R²-0,79l ),!■= 7,930.

107 р<0,01). Независимым фактором, влияющим на дисперсию аутоантител к

двухспиральной ДНК, в данной модели является IL-2.

На содержание аутоантител к нуклеопротеидам у больных с хроническими воспалительными заболеваниями наиболее значимо оказывает влияние сочетание следующих иммунологических параметров: IL-2, фагоцитарное число, абсолютное содержание эозинофилов и лейкоцитов. При этом коэффициент детерминации R²=100%, уровень значимости р<0,001, т.е. модель можно считать в высокой степени информативной и достоверной.

Методом многофакторного анализа влияния иммунологических показателей на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде установлено значительное влияние аутоантител к нуклеопротеидам, РБТЛ с конканавалином, В-лимфоцитов (СД22+), индекса пролиферации моноцитов и IgM (R²=0,993 (Adjusted R²=0,983), F=l 06,698, p<0,001). Выделены независимые предикторы содержания аутоантител к ds-DNA: аутоантитела к нуклеопротеидам, индекс пролиферации, СД22+ и РБТЛ с конканавалином. Из проведенных иммунологических исследований на содержание аутоантител к нуклеопротеидам оказывают влияние аутоантитела к ds-DNA, РБТЛ с конканавалином, относительное содержание лимфоцитов и IgM (R²=0,640 (Adjusted R²=0,55), p<0,01).

Многофакторный анализ выявил наиболее значимые факторы, влияющие на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК при онкологической патологии: трансферрин, РБТЛ с конканавалином и РЭА (R²=0,995 (Adjusted R²=0,990), F=199,182, p<0,001). На содержание аутоантител к нуклеопротеидам при онкопатологии значимое влияние оказывают компонент комплемента СЗ, трансферрин, СД7+ и относительное содержание лимфоцитов (R²=0,952 (Adjusted R²=0,904), p<0,001).

Таким образом, определили, что сезон является независимым фактором, влияющим на содержание аутоантител.

108

Фактор возраста оказывает влияние на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК. Установлена прямая корреляционная связь возраста с уровнем аутоантител к двухспиральной ДНК.

Корреляционной взаимосвязи между полом и содержанием исследуемых аутоантител в нашем исследовании не выявлено. Установили, что пол не является независимым фактором, влияющим на содержание аутоантител.

Выявленные взаимосвязи между содержанием аутоантител и показателями иммунитета, регистрируются как у здоровых, так и больных и имеют одинаковую направленность. Установлена обратная взаимосвязь уровней содержания аутоантител с показателями Т- (лимфоциты, CD 10+, РБТЛ с ФГА) и В- (CD22+, РБТЛ с Кон-А) клеточной лимфопролиферации. Регистрируются отрицательные взаимосвязи уровней аутоантител с фенотипами лимфоцитов CD3+, CD5+, HLADR+, а также CD8+,CD16+, CD95+, свидетельствующие о подавления процессов активизации, дифференцировки и апоптоза иммунокомпетентных клеток.

У практически здоровых и больных выявлены положительные корреляционные взаимосвязи между уровнем содержания аутоантител и индексом пролиферации моноцитов, промоноцитами, ЦИК, IgE, РЭА, трансферрином. У больных регистрируются также положительные корреляционные взаимосвязи с IgM, IgG и пропердином.

Проведенные исследования не выявили взаимосвязи между содержанием аутоантител и провоспалительных цитокинов у практически здоровых людей. Данные взаимосвязи устанавливаются при повышенных концентрациях провоспалительных цитокинов. У больных, вне зависимости от патологии, всегда регистрируются прямые корреляционные взаимосвязи уровней содержания аутоантител и IL-2 , а также TNF-ot.

Методом факторного анализа подтверждено доминирующее влияние вышеуказанных факторов на содержание аутоантител. Установили, что

по

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изменение границ толерантности к своим собственным структурам вне зависимости от механизмов формирования этого процесса ведет к образованию аутоантител [26,157]. Причиной аутоиммунных реакций в климатических условиях Севера считают развитие микродеструктивных процессов в органах, подвергающихся наибольшей функциональной перегрузке [16,35,108], катаболический эффект повышенной активности глюкокортикоидов, а также более высокое содержание в крови у жителей Севера и в условиях воздействия низких температур свободных жирных кислот [35,59], гистамина и гепарина [34]. Установлено, что изменения в соотношениях содержания в периферической крови Т- и В- лимфоцитов, тенденция к лейкопении, особенно на ранних этапах адаптационного процесса, определяют более широкие возможности для аутосенсибилизации у жителей Севера [36].

Проведенный нами анализ лабораторных исследований практически здоровых жителей Севера Европейской территории РФ от 20 до 75 лет выявил широкий спектр аутоантител различной специфичности, который включает в себя образование аутоантител к двухспиральной ДНК, рибонуклеопротеидам, тромбоцитам, аутогемагглютининов, аутолейкоагглютининов.

Повышенный уровень аутоантител в среднем у северян обнаружен у 31% практически здоровых людей. Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител у практически здоровых колеблется от 10,39% при обнаружении аутоантител к тромбоцитам до 31,43% при обнаружении аутолейкоагглютининов. Чаще регистрируется повышение уровней аутолейкоагглютининов - 31,43%, аутоантител к двухспиральной ДНК -26,79%, аутогемагглютининов - 18,37%, реже аутоантитела к тромбоцитам -12,5%, нуклеопротеидам - 10,39%. Частота регистрации аномально высоких концентраций аутоантител у больных достоверно выше, чем у практически здоровых (р<0,001). Чаще регистрируется повышение аутогемагглютининов

Ill

(86,52%), аутоантител к двухспиральной ДНК (78,42%), аутолейкоагглютининов (77,06%), аутоантител к тромбоцитам (71,24%), у половины обследованных больных - аутоантитела к нуклеопротеидам (50,85%).

Сравнение полученных нами результатов с данными, имеющимися в литературе, свидетельствует о том, что у практически здоровых жителей Заполярья частота выявления аутоантител несколько выше, но также как и в менее суровых условиях, наиболее распространенными являются аутолейкоагтлютинины, аутогемагглютинины. По данным Л.К.Добродеевой у жителей Заполярья выявлена следующая частота регистрации повышенных уровней аутоантител: аутолейкоагглютинины - 34,55%, аутоантитела к ДНК -31,58%, аутогемагглютинины - 23,53% [34,36]. По данным В.М.Шубика у жителей территорий НАО частота выявления повышенных концентраций аутоантител к двухцепочечной ДНК составляет 52,63±1,74%, к рибонуклеопротеидам - 11,25±2,84%, частота регистрации противотканевых комплементсвязывающих антител достигает 70-90% [108].

Полученные нами результаты свидетельствуют о значительно более высокой частоте выявления аутоантител у практически здоровых жителей Европейского Севера при сравнении с аналогичными показателями более комфортных зон проживания. Повышенные титры аутоантител в Санкт-Петербурге регистрируются в крови у 13% обследованных лиц [39,53]. Антинуклеарные антитела выявляют у 5% здоровых женщин Ленинградской области [71]. У жителей средней полосы Сибири процент положительных титров лейкоагглютининов не превышает 18% [108]. По данным зарубежных авторов, антитела к ДНК обнаруживаются в сыворотке крови практически здоровых людей в 2-8% случаев [157,176,192].

Результаты наших исследований показали, что средние концентрации аутоантител у практически здоровых жителей Севера Европейской территории РФ не превышают физиологических пределов, однако границы колебания значений имеют размах до аномально высоких. Содержание

112

аутоантител к ds-DNA у практически здоровых варьирует в широких пределах - от 22 до 94 МЕ/мл. Среднее содержание не превышает уровень физиологической границы (50МЕ/мл) и составляет 44,79±1,20 МЕ/мл. Средний уровень аутоантител к нуклеопротеидам составляет 0,59 МЕ/мл, пределы колебаний среднего - 0,18 - 1,66 МЕ/мл. Средний уровень аутоантител к тромбоцитам и аутогемагглютининов также не превышает физиологический предел, соответственно 3,96±0,10 и 4,65±0,13 log₂. Содержание аутолейкоагглютининов несколько выше и составляет 4,99±0,21 log₂, пределы колебаний данных аутоантител находятся в диапазоне 3,33 - 8,33 Iog2. Обращает внимание, что средние уровни почти всех исследуемых аутоантител у больных вне зависимости от патологии выше физиологических пределов и значительно отличаются от средних уровней аутоантител у практически здоровых лиц (р<0,001). Однако пределы колебаний их содержания достоверно не отличаются, что свидетельствует о достаточно широких пределах колебаний у практически здоровых жителей Севера. Большая вариабельность концентраций аутоантител у практически здоровых лиц свидетельствует об адаптивных возможностях организма в регуляции гомеостаза; возможно, что именно сокращение границы между нормой и патологией увеличивает степень риска развития аутоиммунной патологии на Севере.

При сравнении содержания аутоантител, полученных в результате наших исследований, с данными исследования жителей высоких широт выявлено, что среднее содержание аутоантител к двухспиральной ДНК выше физиологической границы и составляет у жителей Заполярья 51,68±2,14МЕ/мл [34,36,37,38,39]. Содержание аутоантител к двухспиральной ДНК у здоровых доноров Черноголовки (Московская область) не превышает уровень физиологической границы, по данным О.Н.Панченко с соавторами, и составляет по IgM - 0,69±0,07отн.ед., по IgG - 0,85±0,06отн.ед [88]. По результатам исследования, проведенным в Татарстане А.А.Зайнуллиным среднее содержание аутоантител к РНК у доноров от 16 до 60 лет составило

113

0,95±0,01отн.ед, аутоантител к ds-DNA - 1,0±0,02отн.ед, что также не превышает уровень физиологической нормы [12].

Средние концентрации и частота регистрации аномальных концентраций аутоантител несколько ниже, чем у жителей более высоких широт, но значительно выше показателей средней полосы России. Однако не является специфичной только для Севера и установленная нами довольно высокая частота регистрации аутоантител. Появление и нарастание содержания аутогемагглютининов, аутолейкоагглютининов, аутоантител к тромбоцитам выявляют и в жаркие месяцы в тропиках, и в условиях высокогорья [73]. Данные факты свидетельствуют о том, что аутосенсибилизация отражает напряжение иммунных механизмов регуляции в неблагоприятных климатогеографических условиях. Чем дискомфортнее зона проживания, тем выше концентрация аутоантител, тем шире и разнообразнее их спектр.

Сезонные колебания уровней иммунологических показателей более всего демонстрируют их зависимость от климатических воздействий [4,18,37,38,39,108]. Как известно, к неблагоприятным климатическим факторам, влияющими на увеличение концентраций и многообразия продуктов тканевого обмена со свойствами аутоантигенов, относятся охлаждение, резкая фотопериодика и напряженный иономагнитный режим. В октябре месяце на Севере солнечная активность в 5 раз меньше, чем в средней полосе России, а в следующие 4 месяца (ноябрь, декабрь, январь, февраль) естественная радиация солнца практически отсутствует, недостаток света сохраняется до апреля. Кроме того, воздействие низких температур в зимний период, способствует повышению содержания аутоантигенов и, соответственно, аутоантител [108]. Литературные данные свидетельствуют о том, что в полярную ночь заметно подавлены практически все иммунные реакции, с наступлением полярного дня, напротив, наблюдается резко выраженная активизация иммунных механизмов [39].

114

Установленная нами четко выраженная зависимость частоты выявления и концентрации в сыворотке аутоантител от сезона года и фотопериодичности подтверждает прямую связь интенсивности аутоантителообразования с воздействием климатических факторов.

Повышение уровня частоты обнаружения исследуемых аутоантител зимой в период биологических сумерек с 21,79% в ноябре резко возрастает к концу биологических сумерек в феврале до 46,30% (х²=8,83, р<0,01), и снижается в период восстановления естественной солнечной активности - в мае до 40%. Частота регистрации аномальных концентраций аутоантител к двухспиральной ДНК достоверно увеличивается с 6,38% в ноябре до 41,51% в феврале (р<0,001), аутоантител к тромбоцитам с 3,51% в ноябре до 75% в феврале (р<0,001) и снижаются в мае до 38,46% и 8,33% соответственно (р<0,01). Регистрируемая частота повышенных концентраций аутоантител к нуклеопротеидам увеличивается с 10,53% в ноябре до 16,33% в феврале, в мае аномальные уровни аутоантител к нуклеопротеидам не зарегистрированы. Повышенные титры аутолейкоагглютининов, аутогемагглютининов обнаруживаются в 2-3 раза чаще в конце периода биологических сумерек. Средняя концентрация аутоантител к двухспиральной ДНК также достоверно и значительно возрастает в феврале с 38,72±1,28 МЕ/мл до 49,68±1,94МЕ/мл (р<0,000), сохраняясь в мае фактически на том же уровне - 46,40±2,59МЕ/мл (р<0,01). Содержание аутоантител к тромбоцитам увеличивается с 3,84±0,08 log₂ в ноябре до 5,83±0,871og₂ в феврале (р<0,001) и снижается в мае, в период восстановления солнечной активности — 4,25±0,391og2 (p<0,05). Аналогичные изменения наблюдаются в динамике содержания всех исследуемых аутоантител.

Зависимость содержания аутоантител от сезона и фотопериодичности у жителей Севера Европейской территории РФ подтверждена: средние концентрации и частота регистрации аномальных концентраций аутоантител нарастают в зимний период с периода биологических сумерек в ноябре, достигают максимума в феврале и снижаются в мае, в период восстановления

115

естественной солнечной активности. Методом факторного анализа установлено, что сезон является независимым фактором, влияющим на содержание аутоантител к двухспиральной ДНК, аутоантител к тромбоцитам, аутогемагглютининов (R²=0,136 (Adjusted R²=0,128) p<0,001),

Данные факты свидетельствуют о том, что повышение концентраций аутоантител в неблагоприятных условиях является защитным физиологическим механизмом, направленным на выведение аутоантигенов и поддержание иммунного гомеостаза.

Проведен сравнительный анализ содержания исследуемых аутоантител в возрастных группах 20-49 лет и 50-75 лет. Содержание аутоантител к двухцепочечной ДНК — 46,59±1,65 МЕ/мл, аутоантител к тромбоцитам — 4,17±0,14 log₂ достоверно выше в возрастной группе 50-75 лет (р<0,05). Повышенные концентрации аутоантител к нуклеопротеидам у практически здоровых в возрастной группе 20-49 лет не регистрировались.

Сравнение уровня содержания аутоантител к ds-DNA в сыворотке крови здоровых людей разных возрастных групп выявило нарастание уровней содержания аутоантител с возрастом, наиболее значимое увеличение содержания аутоантител регистрируется с 60 лет вне зависимости от пола. Уровень аутоантител к ds-DNA в возрастной группе 50-59 лет составляет 42,58±2,11МЕ/мл, в возрастной группе 60-75 лет - 50,71 ±2,38МЕ/мл (минимальное значение - 28МЕ/мл, максимальное - 94МЕ/мл) и достоверно отличается от других возрастных групп (р<0,01). Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител в старшей возрастной группе составляет 41,67% и достоверно отличается от частоты повышенных уровней аутоантител к ds-DNA в возрастной группе 20-29 лет (8,33%, р<0,05). В других возрастных группах отличий от генеральной совокупности обнаружено не было. Установлена прямая корреляционная связь возраста с уровнем содержания аутоантител (г=0,23, р<0,01).

Необходимо отметить, что следствием высокой фоновой иммунной активности на Севере является смещение возрастных изменений в системе

116

иммунитета, что проявляется торможением возрастного его формирования у детей и более раннего проявления признаков сокращения резервных возможностей регуляции иммунного гомеостаза [39].

Итак, комплекс неблагоприятных климатических параметров создает условия для развития хронического антигенного стресса, активирующего систему иммунитета по типу аутосенсибилизации, увеличивая риск сокращения резервных возможностей поддержания иммунного гомеостаза, обуславливая ее старение у взрослых и формируя высокий уровень развития вторичных дефектов иммунной защиты. В данном случае аутосенсибилизация может являться защитной реакцией, направленной на сохранение гомеостаза, на фоне возрастных нейрогормональных и метаболических и других эндогенных процессов. Мнение о том, что под влиянием комплекса неблагоприятных, длительно воздействующих факторов возможна активизация процессов аутосенсибилизации, подтверждается и тем, что уровень различных аутоантител увеличивается при переутомлении [106], повышенной физической нагрузке [107], беременности [12], зависит от степени тканевого метаболизма количества поступивших в кровь продуктов обмена [36,108].

В наших исследованиях при сравнении уровня содержания и частоты регистрации повышенных концентраций аутоантител у лиц мужского и женского пола вне зависимости от возраста достоверных различий не выявило (р>0,05). Существует достаточно много половых гормонов, которые оказывают влияние на иммунный метаболизм, но в регуляции антителообразования, вероятно, они не играют существенной роли. Литературные данные очень разноречивы и единичны по данному вопросу, однако в публикациях последних лет подчеркивается, что в условиях физиологической нормы осуществляется постоянная продукция аутоантител к огромному числу внеклеточных, мембранных, внутриклеточных и внутриядерных антигенов, причем уровни синтеза и секреции таких антител

117

отличаются очень небольшими индивидуальными вариациями и мало зависят от пола [91].

С целью изучения характера изменений иммунной системы при аномально высоких концентрациях аутоантител, проведен сравнительный анализ показателей в группе лиц с повышенными концентрациями аутоантител с группой практически здоровых, уровень аутоантител у которых не превышал физиологической границы.

Установлено, что повышение аутоантител у практически здоровых лиц сопряжено с достоверным (р<0,05) снижением содержания лейкоцитов (5,70±0,48 против 6,80±0,34х10⁹/л), лимфоцитов (32,42±1,14 против 35,06±0,99хЮ⁹/л), нейтрофилов (3,18±0,27 против 3,73±0,21х10⁹/л) и сочетается с процессами пролиферации в системе моноцитов (1,26±0,03 против 1,19±0,01) с повышением содержания промоноцитов в составе моноцитограммы ,((Ю»80±0,91 против 58,54±0,48%). Установлены отрицательные взаимосвязи между содержанием аутоантител и содержанием лейкоцитов (г=-0,32; р<0,001), лимфоцитов (г=-0,35; р<0,001). Выявлена прямая взаимосвязь между концентрацией аутоантител и уровнем пролиферации моноцитов (г=0,35; р<0,001), содержанием промоноцитов в моноцитограммы (г=0,2б; р<0,01), что свидетельствует об активизации пролиферации и дифференциации системы моноцитов. Можно предположить, что активизация моноцитарной системы вызывается повышенным содержанием аутоантител.

Проведенные исследования показали, что аутосенсибилизация формируется на фоне подавления процессов активизации и дифференцировки и апоптоза иммунокомпетентных клеток. Об этом свидетельствует статистически достоверная обратная взаимосвязь между содержанием аутоантител со следующими фенотипами лимфоцитов: CD5+ (г=-0,43, р<0,001), CD3+ (r=-0,44; p<0,001), HLADR+(r=-0,36; p<0,001), а также CD8+ (г=-0,40; р<0,001), CD16+ (r=-0,43; p<0,001), CD95+ (г=-0,26; р<0,05). Подавление процессов активизации иммунокомпетентных клеток

118

подтверждается достоверным снижением содержания Т-лимфоцитов с маркерами CD5+, CD3+ и главного комплекса гистосовместимости класса П в группе практически здоровых лиц с аномально высокими концентрациями аутоантител (0,74±0,07х10⁹/л; 0,64±0,07х10⁹/л и 0,57±0,11x10% соответственно (р<0,001). При этом дефицит содержания Т лимфоцитов составляет 84,85%.

Содержание цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров CD 16+, отражающие процессы дифференцировки иммунокомпетентных клеток, достоверно ниже у практически здоровых лиц с аномально высокими концентрациями аутоантител (0,39±0,05х10⁹/л, 0,30±0,03х10⁹/л соответственно (р<0,001), чем аналогичные показатели у лиц, с нормальным содержанием аутоантител (0,56±0,03 и 0,45±0,02 х10⁹/л). Среднее содержание Т-лимфоцитов с рецептором к фактору некроза опухоли (CD95+) достоверно ниже (0,46±0,06х10⁹/л) у лиц с повышенным содержанием аутоантител, чем у практически здоровых, уровень аутоантител у которых не превышает физиологической границы (0,53±0,03х10⁹/л, р<0,05).

Повышенный уровень аутоантителообразования формируется подавлением Т- и В-клеточной лимфопролиферации по содержанию в крови лимфоцитов (r=-0,35; p<0,001), CD10+(r=-0,49; p<0,001), CD22 (г=-0,31; р<0,01), уровню РБТЛ с ФГА (г=-0,37; р<0,001) и Конканавалином-А (г=-0,34, р<0,001). Абсолютное содержание лимфоцитов (1,85±0,15х10⁹/л), CD 10+ (0,22±0,02х10⁹л) достоверно ниже в группе практически здоровых с повышенным содержанием аутоантител (2,24±0,09; 0,28±0,02 и 45,82±1,59 х10⁹л, при р<0,001). Содержание антител ообразующих клеток, фенотипируемых как CD22+, у практически здоровых лиц с повышенным содержанием аутоантител достоверно ниже (0,39±0,03х10⁹/л и 31,03%), чем в группе с уровнями аутоантител, не превышающих физиологической границы (0,51±0,02хЮ⁹/л, 58,9%, р<0,001). Уровень бластгрансформации В-лимфоцитов составляет в среднем 51,14±3,62% у лиц с повышенным содержанием аутоантител, он достоверно выше в группе лиц с нормальным

119

содержанием аутоантител - 64,91±2,39% (р<0,001). При этом частота дефицита активности индуцированной бласттрансформации В - лимфоцитов составляет 58,62%. Данные факты свидетельствуют о том, что аутосенсибилизация развивается на фоне дефицита Т- и В-клеточной лимфопролиферации, которая, вероятно, возникает в результате различных супрессивных факторов.

Изучение аутоантител представляет особый интерес с позиции участия в механизмах гуморального иммунитета. Токсическая концентрация ЦИК регистрируется в 84,38% случаев у лиц с повышенным содержанием аутоантител, усредненные показатели при этом составляют 3,04±0,17г/л, что достоверно выше, чем в группе с нормальным содержанием аутоантител (2,48±0,11г/л, р<0,001). Концентрация аутоантител находится в прямой зависимости с содержанием средних и крупных ЦИК (г=0,36; р<0,001), т.е. растет в условиях, когда организм не справляется с их элиминацией.

Напряжение иммунных механизмов вызывает длительную активацию гуморального звена, что ведет за собой повышение концентрации и спектра иммуноглобулинов. Как известно, иммуноглобулины являются одним из факторов, регулирующих пролиферацию. В анализируемых группах практически здоровых старшей возрастной группы и больных, вне зависимости от нозологии регистрируется прямая взаимосвязь уровней и спектра содержания аутоантител с IgG (r=-0,34,p<0,05), IgM (r=0,16,p<0,05). Повышение содержания иммуноглобулинов и ЦИК, прямые корреляционные взаимосвязи с содержанием аутоантител свидетельствуют об активизации системы комплемента классическим путем. Кроме того, у больных, вне зависимости от патологии установлена прямая взаимосвязь между содержанием аутоантител и пропердином (г=0,32; р<0,01). Следовательно, аутосенсибилизация сопровождается активизацией комплемента, которая может проходить не только классическим, но и альтернативным путем.

Во всех исследуемых группах установлена прямая корреляционная взаимосвязь между содержанием аутоантител и IgE (r=0,38;p<0,001).

120

Гиперпродукция IgE в 50% случаев сочетается с аномальными концентрациями аутоантител, а среднее содержание IgE у практически здоровых с повышенными концентрациями аутоантител превышает уровень физиологического предела и составляет 100,94±7,94 МЕ/мл. Создается впечатление, что аутосенсибилизация в данной ситуации включает, как компонент, и реагиновый вариант. Возможно, что мобилизация IgE, обладающего небольшим аффинитетом к связыванию на тканях, цитотропностью и цитотоксичностью, наряду с аутоантителами может отражать напряжение иммунных механизмов защиты у практически здоровых жителей Севера. Подтверждением тому могут служить высокие уровни (14,81%) частоты регистрации аномально повышенных концентраций раково-эмбрионального антигена (РЭА) у практически здоровых с повышенными концентрациями аутоантител. Нами установлена прямая зависимость уровней содержания аутоантител и концентрацией РЭА (г=0,49,р<0,001). Предполагается, что аутоантитела взаимосвязаны с процессом сброса („shedding") эмбрионального белка контактного ингибирования (РЭА) с клетки.

Проведенные исследования также выявили прямую взаимосвязь между содержанием аутоантител и белком крови трансферрином (г=0,36; р<0,001). Известно, что трансферрин может выполнять функции как паракринного, так и аутокринного активатора лимфоцитов. Трансферрин может участвовать в процессинге антигенов [46]. Трансферрин поддерживает клеточную пролиферацию, обеспечивая клетки железом для осуществления важнейших метаболических процессов. При лимфопролиферативных процессах лимфоциты автономно синтезируют трансферрин и также утилизируют железо [46]. Кроме промоторной функции трансферрин сам по себе способен давать иммуномодулирующие эффекты: фрагменты консервативной области его молекулы обладают иммуносупрессивным влиянием, а фрагменты, участвующие в ассоциации с ТФ-рецептором оказывают блокирующий эффект на бласттрансформацию. В наших исследованиях повышенные

121

концентрации трансферрина регистрировали у 85,19% практически здоровых лиц с повышенным содержанием аутоантител, среднее содержание трансферрина при этом было также выше физиологического уровня и составило 4,26±0,14г/л, что достоверно выше содержания сравниваемой группы - 3,56±0,11г/л.

Проведенные исследования не выявили взаимосвязи между содержанием аутоантител и исследуемыми цитокинами у практически здоровых людей. Данные взаимосвязи устанавливаются при повышенных концентрациях провоспалительных цитокинов; у больных, вне зависимости от патологии, всегда регистрируются прямые связи уровней содержания аутоантител и IL-2 (г=0,16; р<0,05), а также - TNF-a (r=0,19; р<0,001), что отражает степень деструкции ткани.

В пользу наличия прямой взаимосвязи между содержанием аутоантител и степенью деструкции ткани также свидетельствует тот факт, что у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде частота обнаружения повышенных концентраций аутоантител достигает 100%, у больных со злокачественными новообразованиями - 87%, что гораздо чаще, чем при аутоиммунной патологии и других патологических состояниях. Объем тканевой травмы, стресс от оперативного вмешательства, операционная кровопотеря оказывают иммуносупрессивное действие на иммунокомпетентные клетки на фоне повышения концентрации продуктов клеточного распада и определяют реакцию иммунной системы на антигенное раздражение повышением уровней и спектра содержания аутоантител.

Методом многофакторного анализа установлено значительное влияние аутоантител к двухспиральной ДНК, РБТЛ с Кон-А, компонента комплемента СЗ, индекса пролиферации моноцитов, ЦИК, трансферрина и TNF-a на содержание аутоантител к нуклеопротеидам при аутоиммунной патологии (R =0,648 (Adjusted R =0,561) р<0,001). Выделены независимые предикторы содержания аутоантител у оперированных больных в раннем послеоперационном периоде: аутоантител к нуклеопротеидам, РБТЛ с Кон-А,

122

CD22+, индекс пролиферации моноцитов, IgM (R²=0,993 (Adjusted R²=0,983) p<0,001). Многофакторный анализ выявил наиболее значимые факторы, влияющие на содержание аутоантител при онкопатологии: трансферрин, РБТЛ с Кон-А, РЭА (R²=0,995 (Adjusted R²=0,990) p<0,001).

Полученные данные свидетельствуют о том, что уровень аутосенсибилизации отражает степень некробиоза. При этом механизм участия аутоантител в процессах утилизации продуктов некробиоза реализуется за счет активизации комплемента классическим и альтернативным путем, а также пролиферации и дифференцировки системы моноцитов. Важной функцией аутоантител является удаление из организма структур, выполнивших свою функцию или потерявших ее, устаревших, поврежденных клеток, а также клеток и продуктов их распада, клеток, изменивших свой фенотип, обладающих антигенными свойствами. Эти данные позволяют сделать вывод о том, что в аутосенсибилизация является защитной реакцией, направленной на сохранение гомеостаза.

123 ВЫВОДЫ

1. У жителей Севера Европейской территории РФ в сыворотке крови
определяется    широкий    спектр    аутоантител    различной    специфичности
(аутоантител к двухспиральной ДНК, рибонуклеопротеидам, тромбоцитам,
аутогемагглютининов,     аутолейкоагглютининов)     и     высокий     уровень
регистрации   повышенных   их   концентраций   (от   10,39%   до   31,43%   в
зависимости от специфичности).

2.        Содержание аутоантител зависит от сезона и фотопериодичности:
средние    концентрации    и    частота    регистрации    аномально    высоких
концентраций    аутоантител    нарастают    в    зимний    период    с    периода
биологических   сумерек в   ноябре,   достигают   максимума   в   феврале   и
снижаются в мае, в период восстановления естественной солнечной радиации.

3. Уровни содержания аутоантител нарастают с возрастом, наиболее
значимое увеличение содержания аутоантител регистрируется с 60 лет вне
зависимости от пола.

4.        Содержание аутоантител повышается на фоне подавления процессов
Т-   и   В-клеточной   лимфопролиферации,   дифференцировки   и   апоптоза
иммунокомпетентных         клеток         и         повышенных         концентраций
провоспалительных цитокинов.

5.        Механизм участия аутоантител в процессах утилизации продуктов
некробиоза    осуществляется    при     активизации     системы     комплемента
классическим    и    альтернативным    путем,    а    также    пролиферации    и
дифференцировки моноцитов.

124 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У практически здоровых людей, родившихся и проживающих на
Севере, выше содержание аутоантител, выявление повышенных их
концентраций не является обязательным свидетельством аутоиммунной
патологии.

2. Необходимо учитывать, что при ряде физиологических состояний
(беременность, повышенные физические нагрузки, стресс) и в периоды смены
фотопериодики на Севере содержание аутоантител увеличивается.

3. Объективные данные о значимости аутоантител в качестве
патогенетического фактора или критерия эффективности лечебно-
профилактических мероприятий можно получить выявлением сероконверсии
в динамике наблюдения.

4. Одновременное увеличение содержания аутоантител к ДНК и РНК у
практически здоровых людей являются признаком биологического старения.

125 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абакушин Д.Н. Гистон как фактор полиспецифичности нормальных
иммуноглобулинов / Д.Н. Абакушин // Мед. иммунология. - 2000. - Т.2,
№2.-С. 119.

2. Авдеенко Н.В. Экологические факторы и аллергия у детей: Автореф.
дис. ... канд. мед. наук /Н.В. Авдеенко. - М., 1989. - 18 с.

3. Адо А.Д. Патологическая физиология / А.Д. Адо. - М.: Триада - X,
2000.- 574 с.

4. Алексеев СВ. Роль истории развития региона в анализе состояния
здоровья населения / СВ. Алексеев, Е.Е. Данцнер, О.И. Янушанец //
Экология человека. - 1995. - №1. - С. 12-14.

5. Антитела к рецептору ТТГ при эндокринной офтальмопатии на фоне
диффузного токсического зоба и при эутиреоидной болезни Грейвса /
Т.Л. Толстухина, Л.В. Трухина, Т.А. Осипова, А.Ф. Бровкина // Мед.
иммунология. - 2003. - Т.5, №3-4. - С 273-274.

6. Антитела при паранеопластических синдромах: подострая дегенерация
мозжечка с антителами против клеток Пуркинье /СВ. Лапин,

Н.В. Шулешова, А.А. Скоромец, А.А. Тотолян // Мед. иммунология. — 2000. - Т.2, № 4. - С. 439-446.

7. Антитела, реагирующие с тромбоцитами / Н.А. Красникова,

Л.П. Порешина, Л.Л. Головкина и др. // Клин. лаб. диагностика. - 2000. - № 5. - С. 40-43.

8. Аутоантигены в оценке функциональной активности мононуклеаров
периферической крови / М.М. Зафранская, И.В. Коктыш, А.А. Милютин
и др. // Мед. иммунология. - 2002. - Т.4, №3. - С. 447-452.

9. Аутоантитела к антигенам щитовидной железы при рецидивирующей
крапивнице / Н.А. Сибгатулина, Н.С. Кузьмина, Н.М. Рахматуллина,
В.Б. Геварзиева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и
иммунобиологии. - 2002. - № 5. - С. 69-71.

126 Ю.Аутоантитела к плазминогену и их возможная патогенетическая роль

при системных воспалительных заболеваниях соединительной ткани /

Л.Д. Козмин, О.П. Близнюков, А.И.Мартынов, З.С. Алекберова //

Иммунология. - 2004. - № 1. - С. 56-62. 11.Аутоантитела к рецепторам ацетилхолина у больных миастенией /

В.Я. Неретин, СВ. Котов, Б.М. Гехт и др. // Альманах клин, медицины.

-2001.-№4.-С. 171-172.

12.Аутоантитела к РНК и ДНК в сыворотке крови здоровых людей/
А.А. Зайнуллин, А.С. Зайнуллина, А.В. Богданова и др. // Мед.
Иммунология. -2003. - Т.5, №1-2. - С. 157-160.

13.Аутоиммунные реакции у пациентов со злокачественными
новообразованиями различной локализации / Е.Н. Кологривова,

Н.В. Иванова, В.В. Климов и др. // Вопр. онкологии. - 2000. - № 1. -

С. 61-63. Н.Ахмедов Х.С. Нарушение иммунного гомеостаза у больных системной

склеродермией / Х.С. Ахмедов, Р.А. Карабоева // Иммунология. — 2001. -

№3.-С.53-55. 15.Буеверов А.Щ. Патогенез аутоиммунных заболеваний печени /

А.Щ. Буеверов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии,

колопроктологии. - 2001. - Т. 11, №4. - С. 59-61. 16.Васильев Н.В. О механизмах хронизации патологических процессов на

Крайнем Севере / Н.В. Васильев, Т.И.Коляда // Вестн. Академии мед.

наук - 1979. - Вып.6. - С. 66-70. П.Вершигора А.Е. Основы иммунологии / А.Е. Вершигора. - Киев, 1980. -

С. 504. 18.Влияние атмосферных загрязнений на клинико-иммунологические

показатели / А.Х. Аленова, Н.И. Буравлева, СИ. Болгова,

Г.Г. Деревянко // Здравоохранение Казахстана. - 1992. - № 8. - С. 18-19.

127 19.Влияние плазмафереза на активность антитромбоцитарных антител /

Е.А. Зотиков, Л.Л. Головкина, P.M. Кутьина и др. // Клин. лаб.

диагностика -2002. - №4. - С. 54-55. 20.Воробьёва Л.Н. Исследование показателей IgE системы иммунитета у

больных с рассеянным склерозом / Л.Н. Воробьева, В.Б. Гервазиева,

В.А. Демкина // Russian journal of immunology. - 2004. - Vol. 9, Suppl. 1.

- С 144. 21.Воронцова Т.В. Аутоиммунные реакции в щитовидной железе и

радиация / Т.В. Воронцова // Иммунопатология. Аллергология.

Инфектология. - 2000. - № 2- С. 20-27. 22.Върбанова Б. Клинические ассоциации класс-специфических

ревматоидных факторов у детей с ювенильным хроническим артритом

при поражении отдельных суставов и при полиартикулярной форме /

Б. Върбанова// Ревматология. - 1998. - № 3. - С. 43-48. 23.Выявление аутоантител к нейтрофилам у больных иммунным

(гаптеновым) агранулоцитозом / М.Н. Васильева, И.А. Демидова, К.С.

Момотюк и др. // Клин. лаб. диагностика -2003. - № 1. - С. 34-38. 24.Гервазиева В.Б. Иммуноферментный метод количественного

определения IgG-антител к основному белку миелина / В.Б. Гервазиева,

Н.Л. Воробьева, В.В. Сверановская //Иммунология. - 2000. - № 2. - С.

52-57. 25.Головкина Л.Л. Антигены тромбоцитов / Л.Л. Головкина, Е.А. Зотиков

// Клин. лаб. диагностика. - 2002. - №3. - С. 23-25. 26.Грабар П.Н. Аутоантигены и возможность образования аутоантител /

П.Н. Грабар // Врачеб. дело. - 1960. - № 1. - С. 1-12. 27.Григорова О.П. Роль моноцитарной системы в реактивности человека. /

О.П. Григорова // М.: Медицина. - 1956. - 189с. 28.Гуморальные иммунологические аспекты патогенеза ревматизма,

неревматического кардита и ювенильного ревматоидного артрита у

128 детей / П.С. Мощич, А.В. Гаевская, Ю.В. Марушко // Шкар. справа. -

2001.-№5-С. 48-52.

29.Дарнская Н.Г. Общность реакции организма на воздействие различных физических факторов и ионизирующего излучения как основа для прогнозирования радиочувствительности организма / Н.Г. Дарнская, А.Ю. Григорьев, С.С. Кузнецова // Радиация и организм. - Обнинск, 1984-С. 28-31.

ЗО.Дегтяр Ю.С. Состояние иммунного статуса у жителей Ненецкого автономного округа / Ю.С. Дегтяр, Л.К. Добродеева // Экология человека. - 1998. - № 3. - С. 8-9.

31.Динамика уровня аутоантител к фактору роста нервов у детей с дисгенезиями мозга / Т.П. Клюшник, СЮ. Ишханова, С.А. Краснолобова, P.P. Лидеман // Журн. неврологии и психиатрии. -2002.- №5. -С. 49-51.

32.Динамический анализ уровней антител к основному белку миелина и к ДНК у больных рассеянным склерозом и выявление их каталитической активности / О.О. Фаворова, О.Г. Кулакова, Е.И. Гусев и др. // Материалы объед. иммун. форума. - Екатеринбург, 2004. - С. 61.

33.Дмитриева И.В. Показатели клеточного и гуморального иммунитета у детей с различными формами бронхолегочной патологии / И.В. Дмитриева, В.В. Сперанский // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиол. и патол. состояниях. -Челябинск, 2000. - С. 32-33.

34. Добродеева Л.К. Аутоантитела у практически здоровых людей / Л.К. Добродеева, Г.А. Суслонова // Иммунология. - 1990. - № 2. - С. 52-55.

35.Добродеева Л.К. Взаимосвязи в системе иммунитета / Л.К. Добродеева, Л.С. Щеголева, Л.В. Сенькова // Мед. иммунология. - 2000. - Т.2, № 2. -С.127.

129 36.Добродеева Л.К. Грипп и ОРЗ. Иммунологическая реактивность

коренного и пришлого населения Севера Европейской территории

СССР // Дис.... д-ра мед. наук / Л.К. Добродеева. - Архангельск, 1988. 37.Добродеева Л.К. Иммунологическая реактивность, состояние здоровья

населения Архангельской области / Л.К. Добродеева, Л.П. Жилина. -

Екатеринбург, 2004. - С. 230. 38.Добродеева Л.К. Иммунологическое районирование Архангельской

области / Л.К. Добродеева. - Архангельск, 1997. - 68 с. 39.Добродеева Л.К. Иммунологическое районирование. - Сыктывкар, 2001.

- 110с. 40.Добродеева Л.К. Состояние иммунной системы у человека на Севере /

Л.К. Добродеева, Л.В. Сенькова // Материалы Всероссийской

конференции с международным участием «Проблемы экологии

человека», Архангельск, 2000. - С.69-76. 41 .ДобродееваЛ.К. Экологически зависимые изменения на Севере/

Л.К. Добродеева, Л.В. Сенькова, Н.Б. Московская // Тр. Коми науч.

центра УрО РАН. - 1997. - № 152. - С. 97-116. 42.Дубень С.А. Спектр аутоантител при системных заболеваниях

соединительной ткани: Автореф. дис. ... канд. мед. наук / С.А. Дубень. -

Минск, 2002. - 22 с. 43.Дядык А.И. Патогенез системной красной волчанки: настоящее и

будущее / А.И. Дядык, А.Э. Багрий, И.В. Ракитская //Укр. ревматол.

журн. -2003. - №1. - С. 3-9. 44.Ефимова Н.В. Иммунология в хирургии / Н.В. Ефимова, М.И. Сорокина

//Хирургия. - 1986. - № 6. - С. 124-136. 45.Естественные антитела: строение и происхождение / А.Ю. Кульберг,

И.А. Елистратова, И.А. Тарханова и др. //Иммунология. - 1986. - № 2. -

С. 14-20.

130 46.Жаворонков А.А. Иммунные фракции трансферрина / А.А. Жаворонков,

А.В. Кудрин // Гематология и трансфузиология. - 1999, Т.44. - № 2. -

С.40-42. 47.Захаров Ю.М. Иммунный гомеостаз в экстремальных условиях /

Ю.М. Захаров, В.Н. Потар. - Фрунзе, 1985. - С. 87-149. 48.Зашихин А.Л. Морфофункциональные аспекты влияния факторов

целлюлозно-бумажного производства на состояние различных систем

организма / А.Л. Зашихин, Ю.В. Агафонов, Л.А. Заостровская //

Экология Северной Двины. - Архангельск, 1999. - С. 210-216. 49.3отиков Е.А. Антигены форменных элементов крови и антитела к ним /

Е.А. Зотиков // Клин. лаб. диагностика. - 1999. - № 12. - С. 25-30. 5О.Иммунный ответ к миоглобину при физических нагрузках у юных

спортсменов / С.Г. Осипов, Г.В. Бабаян, ГЛ. Ермолин и др. //

Лабораторное дело. - 1986. - № 9. - С. 550-552. 51.Изучение иммунного статуса новорожденных от здоровых и больных

матерей / Л.А. Трунова, А.П. Шваюн, Т.Д. Амирова и др. //

Иммунология. - 1989. - № 3. - С. 75-77. 52.Иммунный статус участников ликвидации последствий аварии на

Чернобыльской АЭС / С.С. Корытько, О.О. Янович, СВ. Михайлюк,

Л.А. Хмелевская // Иммунопатология. Аллергология. Инфектология. -

2000. -№ 2. - С. 34-42. 53.Иммунодефицитные состояния / Под ред. В.С.Смирнова, И.С.Фрейдлин.

-СПб., 2000.-С. 568 54.Иммунологическая реактивность и сердце / Л.К. Добродеева,

О.А. Миролюбова, И.И. Чернов, А.Н. Шонбин. - Сыктывкар, 2002. —

264с. 55. Иммунологические особенности у работающих на Шпицбергене /

Л.К. Добродеева, А.В. Ткачев, Е.В. Типисова и др. // Рос. акушер, журн.

- 1997. - Т. 87, № 1-2. - С. 111-132.

131 56.Иммунология старения / Под ред. Т. Макинодана, Э. Юниса. - М.: Мир,

1980.-280 с. 57.Иммуноферментный метод выявления естественных антител против

брадикинина при сердечно-сосудистых заболеваниях / Ю.А. Савицкая,

О.Н. Панченко, М.А. Мягкова и др. // Клин. лаб. диагностика - 2001. -

№1.-С. 37-39. 58.Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология / Л. Йегер // М.:

Медицина, 1990. - 525с. 59.Казначеев В.П. Проблема экологии города и экологии человека /

В.П. Казначеев // Урбоэкология. - М., 1990. - С. 7-17 бО.Каманин Е.И. Аутоиммунные реакции при хроническом

гипертрофическом фарингите / Е.И. Каманин, Н.В. Панова // Вестн.

оториноларингологии. - 2003. - № 1. - С. 42-44. 61. Каталитически активные антитела в норме и при аутоиммунных

патологиях / Г.А. Невинский, О.О. Фаворова, К.Н. Неустроев,

В.Н. Бунева // Материалы объед. иммунол. форума. - Екатеринбург,

2004. - С. 60. 62.Клемпарская Н.Н. Нормальные антитела как радиозащитные факторы /

Н.Н. Клемпарская, Г.А. Шальнова. - М., 1978. - С. 136. бЗ.Климович В.Б. Исследование иммуноглобулинов и антител в

клинической практике / В.Б. Климович //Мед. иммунология. - 1999. -Т.1,

№3-4. - С. 66. 64.Климович В.Б. Новые аспекты проблемы антител / В.Б. Климович //

Мед. иммунология. - 2000 - Т.2, № 2. - С. 130 65.Клинико-иммунологические особенности первичного и вторичного

антифосфолипидного синдрома в сочетании с системной красной

волчанкой / А.Э. Сулутьян, B.C. Ширинский B.C., Н.Н. Чапаева,

B.C. Киселев // Иммунология, иммуногенетика, иммунопатология:

Материалы VI отчет, конф. ГУ НИИКИ СО РАМН. - Новосибирск, 2003.

- С. 206-208.

132 бб.Ковалев И.Е. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным

химическим соединениям / И.Е. Ковалев, О.Ю. Полевая. - М., 1985. —

287с. 67.Козлов А.Б. Диагностическая ценность определения антител против

цитоплазмы нейтрофилов при легочной патологии с элементами

васкулита / А.Б. Козлов, О.Б. Ильина, Т.М. Старк // Мед. иммунология.

-2000.-Т. 2,№2.-С. 185. 68.Корниенко Е.Б. Особенности иммунологической реактивности у

женщин позднего репродуктивного возраста, проживающих на Севере:

Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Архангельск, 2002. - 14 с. 69.Критерии старения иммунной системы / И.М. Мирошниченко, И.П.

Косова, В.В. Мальцева и др. // Успехи геронтологии. - 2000. - № 5. - С.

67-68. 70.Кузнецова В.Н. Особенности развития инфекционного иммунного

ответа, аутоиммунных реакций и гиперчувствительности замедленного

типа в экстремальных условиях Севера: Автореф. дис... канд. мед.

наук/В.Н. Кузнецова. —Архангельск, 1995. - 17 с. 71. Лапин СВ. Антинуклеарные антитела: лабораторные тесты и

диагностическое значение / СВ. Лапин, А.А. Тотолян // Мед.

иммунология. - 2001. - Т.З, № 1. - С. 35-50. 72.Маккей Я. Иммунология старения / Я. Маккей, С. Уиттигем, Дж.

Мэтьюз. - М., 1970. - С. 55-74. 73.Миррахимов М.М. Иммунный гомеостаз в экстремальных условиях /

М.М. Миррахимов, М.И. Китаев, Б.И. Тулубеков. - Фрунзе, 1985. - С.

36-39. 74.Митин А.Н. Функциональные последствия взаимодействия аутоантител

с эпителиальными клетками тимуса in vitro / А.Н. Митин, А.А. Ярилин,

Н.И. Шарова // Иммунология. - 1996. - Т. 25, № 6. - С. 30-33. 75.Михайлова Т.В. Взаимосвязь воспалительных, деструктивных и

иммунных процессов у больных с остеоартрозом коленных суставов:

133

Автореф. дис. ... канд. мед. наук/ Т.В. Михайлова. - Новосибирск, 2003.

-21с. 76.Молекулярные основы патогенности ДНК- связывающих аутоантител /

СВ. Сучков, Т.Е. Наумова, Е.Б. Третьяк и др. // Иммунология. - 2004. -

№2.-С. 115-119. 77.Мягкова М.А. Естественные антитела к низкомолекулярным

соединениям / М.А. Мягкова. - М.: Изд-во МГУ, 2001. - 261 с. 78.Мягкова М.А. Естественные антитела к физиологически активным

соединениям / М.А. Мягкова, Ж.Н. Трубачева, О.Н. Панченко //

Иммунология. - 2000. - № 6. - С. 6-9. 79.Насонов Е.Л. Васкулиты и васкулопатии / Е.Л. Насонов, А.А. Баранов,

Н.П. Шилкина. - Ярославль, 1999. - С. 616. 80.Насонов Е.Л. Клиническая иммунопатология ревматических болезней /

Е.Л. Насонов. - М., 1994. - С. 22-25. 81.Насонов Е.Л. Нарушение гуморального иммунитета при хронических

прогрессирующих заболеваниях печени: Дис... канд. мед. наук /

Е.Л. Насонов. -М., 1977. 82.Насонов Е.Л. Современные подходы к иммунологической диагностике

аутоиммунных и иммунокомплексных болезней / Е.Л. Насонов,

В.В. Сура // Терапевт, арх. - 2000. - № 4. - С. 144-150. 83.НасоноваВ.А. Клиническая ревматология / В.А.Насонова,

М.Г. Астапенко. - М., 1989. - С. 592. 84.0лейник Е.К. Особенности экспрессии СД95 на лимфоцитах крови при

онкологической и аутоиммунной патологиях / Е.К. Олейник,

М.И. Шибаев // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2000. - № 9 - С.

324-326. 85.Определение естественных антител к ангиотензинпревращающему

ферменту в сыворотке крови человека иммуноферментным методом /

Т.В. Абраменко, О.Н. Панченко, М.А. Мягкова и др. // Клин. лаб.

диагностика.- 2000.-№12. - С. 22-24.

134 86.Особенности биологического действия малых доз облучения /

Е.Б. Бурлакова, А.Н. Голощапов, Н.В. Горбунова и др. // Радиационная

биология. Радиоэкология. - 1996. - Т.36, Вып.4. - С. 610-631. 87.Отдаленные результаты влияния на организм человека экстремальных

факторов внешней среды / И.А. Волчек, В.Г. Новоженов,

Н.М. Коломоец, А.И. Горелов // Мед. иммунология. - 1999. - Т.1, №3-4.

- С. 53. 88.Панченко О.Н. Иммуноферментный анализ естественных антител к

эндогенным биорегуляторам у больных системной красной волчанкой /

О.Н. Панченко, М.А. Мягкова, И.П.Киселев // Клин. лаб. диагностика. -

2002.-№3.-С. 36-37.

89.Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. - М., 1983. - С. 367. 90.Поверенный A.M. Почему антитела к ДНК являются показателем

аутоиммунного процесса / A.M. Поверенный // Иммунология. — 1986. -

№ 6. - С. 86-88. 91.Полетаев А.Б. Иммунологический гомункулус (иммункулус) в норме и

при патологии / А.Б. Полетаев // Биохимия. - 2002. - № 5. - С. 721-731. 92.Природные скрытые аутоантитела реагируют с отрицательно

заряженными углеводами и ксеноантигеном Bdi / И.В. Леках,

Н.В. Бовин, Г.П. Безяев, A.M. Поверенный // Биохимия. - 2001. - № 2. -

С. 205-210. 93.Ровина А.К. Влияние операции и наркоза на иммунный статус

организма и течение послеоперационного периода / А.К. Ровина,

В.Ф. Кудреватых, А. А. Михайленко // Анестезиология и

реаниматология. - 1986. - № 5. - С. 13-18 94.Роль апоптоза и анергии Т-клеток в патогенезе гнойно-септических

заболеваний / М.Н. Норкин, О.Ю. Леплина, М.А. Тихонова и др. // Мед.

иммунология. - 2000. - Т.2, №1. - С. 35-42. 95.Сигидин Я.А. Диффузные болезни соединительной ткани /

ЯЛ. Сигидин, Н.Г. Гусева, М.М. Иванова. - М., 1994. - С. 544.

135

96.Скрытые натуральные аутоантитела, реагирующие с ДНК и кардиолипином, перекрестно взаимодействуют с антигенами ВИЧ / В.И. Киселева, И.В. Леках, Г.П. Безяева и др. // Иммунология - 2001. -№2.-С. 12-15.

97.Смирнов B.C. Состояние иммунной системы у людей через два года после воздействия факторов радиационной аварии / B.C. Смирнов, В.И. Ващенко, В.Г. Морозов // Иммунология. - 1990. - Т.25, № 6. - С. 63-65.

98.Состояние иммунной системы у лиц, проживающих на Севере в зонах различной степени экстремальности / Л.К. Добродеева, Л.В. Сенькова, Е.В. Типисова и др. // Иммунология. - 2004. - Т.25, № 5. - С. 299-301.

99.Состояние иммунной системы у людей, участвовавших в ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС / П.Н. Любченко, Т.М. Юрина, Е.Е. Креславская, Е.Б. Дубинина // Иммунология. - 1990. -Т.25,№6.-С. 60-63.

100. Сучков СВ. ДНК-абзимы и механизмы цитотоксичности при
системной красной волчанке / СВ. Сучков, А.Г. Габибов, Н.В. Гнучев //
Иммунология. - 2001. - № 4. - С. 47-51.

101. Типы иммунного статуса у ликвидаторов аварии на
Чернобыльской АЭС в отдаленном периоде после катастрофы /

Т.П. Вертлугина, Е.М. Волкова, В.Я. Семке, Н.А. Бохан // Иммунология. -2001.-№4.-С 54-56.

102. Трухан Д.И. Аутоиммунные реакции при остром и хроническом
панкреатите / Д.И. Трухан, А.В. Волковский //Актуал. вопр. внутренней
патологии. - 2000. - № 5. - С. 121-122.

103. Физиология иммунной системы и экология / В.А. Черешнев,
Н.Н. Кеворков, Б.А. Бахметьев, СВ. Ширшев // Аллергия, астма и клин,
иммунология. - 2000. - № 8 - С. 21-27.

104. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы / P.M. Хаитов // Рос.
физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2000. - Т.86. № 3. - С 252-267.

136

105. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / Р.М.Хаитов,
Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов. - М., 1995. - 219 с.

106. Шубик В.М. Иммунитет и здоровье спортсменов / В.М. Шубик,
М.Я. Левин. - М.: Физкультура и спорт, 1985. - 175с.

107. Шубик В.М. Иммунологическая реактивность юных спортсменов /
В.М. Шубик, М.Я. Левин. - М., 1982. - 135 с.

108. Шубик В.М. Проблемы экологической иммунологии /
В.М. Шубик. - М., 1976. - 240 с.

109. Шубик В.М. Ядерные взрывы на Новой Земле / В.М. Шубик. -
СПб., 1998.-138 с.

ПО. Эндокринная система и обмен веществ у человека на Севере / А.В. Ткачев, Е.Р. Бойко, З.Д. Губкина и др. // Сыктывкар: Коми научный центр УрОРАН, 1992. - 156 с.

111. Эффекторная фаза гуморального иммунитета в сквамозных
элементах при роже, псориазе и в норме / Б.Ф. Синицын, В.М. Петров,
А.А. Одинец и др. // Сучасш шфекци. - 2004. - № 2. - С. 79-84.

112.                                     Яковлева      И.Р.      Особенности      иммунного      гомеостаза      у
неоперированных       и       оперированных       больных       хроническим
холециститом:   Автореф.   дис.канд. мед.   наук / И.Р. Яковлева. -
Архангельск, 2003. - 18с.

113. Яровинский Б.Г. Количественное определение IgE и IgG к ДНК у
больных атопическим дерматитом и атопической аллопецией методом
ИФА / Б.Г. Яровинский, В.А. Егоров, А.В. Фридлиб // Клин. лаб.
диагностика.-2001.-№ 11.-С.38.

114. A cellular link between autoantibodies and inflammatory arthritis /
M.D. Lee, S.D. Friend, F.M. Gurish et al. // Science. - 2002. - № 297. - P.
1689-1692.

115. Abuaf N. Autoimmunite normale et pathologique: Physiologie et
genetigue / N. Abuaf isen, A.-M. Rouquette, B. Rajoely // Eurobiologiste. -
2001.-N255-256.-P. 3-13.

137

116. Adams D.A. Specific inhibition on human cyp lAr using a targeted
antibody / D.A. Adams, RJ. Edwards, D.S. Davies // Biochemical
Pharmacology. - 1997. - Vol.54, N 1. - P. 189-197.

117. Adhami E. Calculating the etiology of systemic lupus erythematosus /
E. Adhami //Med. Hypotheses. - 2004. - N 2. - P. 237-246.

118. Advances in autoantibodies in SLE / C.A. Miihlen, E.K. Chan, E.
Anges- Cano et al. // Lupus. - 1998. - Vol. 7. - P. 507 -514.

119. Age-related autoantibody production in a nonhuman primate model / R.
Attanasio, K.M. Brasky, S.H. Robbins et al. //Clin. and Exp. Immunol. -
2001.-N3.-P. 361-365.

120. Ahsan H. Oxygen free radicals systemic autoimmunity / H. Ahsan,
A. Ali, R. AH // Clin. and Exp. Immunol. - 2003. - N 3. - P. 398-404.

121. Antibodies to nonenzymatically glucosylated albumin in the human
serum./ H. Nakayama, Sh. Taneda et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.
-1985.Vol.134.-P. 720-725.

122. Antibody reactivity against thyroid peroxidase and myeloperoxidase in
autoimmune thyroiditis and systemic vasculitis / A.M. Haapala,

P. Parkkonen, J. Mustonen, E. Soppi // Scandinavian J. of Immunology. -1997. - Vol. 46, N 1. - P. 78-85.

123. Anticardiolipin antibodies in autoimmune thrombocytopenic purpura /
E.N. Harris, A.E. Gharavi, U. Hedre et. al // BritJ.of Haematol. - 1985. -
Vol.59.-P. 231-234.

124. Antigenicity, storage, and aging: physiologic autoantibodies to cell
membrane and serum proteins and the senescent cell antigen / M.M. Kay,
K. Sorenser, P. Nong, P. Boldon // Mol. cell. Biochem. - 1982. - Vol. 49. - P.
65-85.

125. Antinuclear antibodies as potential markers of lung cancer / F.
Fernandez-Madrid, P.J. VandeVord, X. Yang et al. // Clin. Cancer Res. -
1999.-N 6.-P. 1393-1400.

138

126. Antinuclear antibody testing in a regional immunopathology laboratory
/ R. Thomson, J. Peter, T. Nikoloutsopoulos et al. //Immunol, and Cell Biol.
-2003.-N5.-P. 409-412.

127. Antinuclear autoantibodies in Gulf War-related illness and chronic
fatigue syndrome patients / A. Skowera, F. Stewart, E.T. Davis et al. // Clin.
and Exp. Immunol. - 2002. - N 2. - P. 354-358.

128. Aortic arch syndrome associated with anticardiolipin antibodies and the
lupus anticoagulant / R.A. Ashorson, S.D.Morgan, N. Harris et al. // Arthr.
and Rheum. - 1985. - Vol.28. - P. 594-595.

129. A single germline VH gene segment of normal A/J mice encodes
autoantibodies characteristic of systemic lupus erythematosus / Y. Naparstek,
T. Mansar et al. // J. Exp. Med. - 1986. -Vol. 164. - P. 614-626.

130. Aspinall R. Longevity and the immune response / R. Aspinall //
Biogerontology. - 2000. - N 3. - P. 273-278.

131. Autoantibodies against all the phospholipids: a comparative systematic
study with systemic lupus erythematosus and healthy sera / L. Maneta-Peyret,
С Previsani, Y. Sultan, J.H. Bezian // Eur. J. Clin. Chem. Clin.Biochem. -
1991. -Vol. 29, - N 1. -P. 39-43.

132. Autoantibodies to neuronal glutamate receptors in patients with
paraneoplastic neurodegenerative syndrome enhance receptor activation /
L.C. Gahring, R.E. Twyman, J.E. Greenlee, S.W.Rogers // Mol. Med. - 1995.
-Vol. 1.-P. 245-253.

133. Beattlie R.M. Lipocortin-1 autoantibody concentration in children with
inflammatory bowel disease / R.M. Beattlie R.M., N. J. Goulding // Arthritis
Rheum, 1995 May; Vol. 28 (5), P. 594-595.

134. В cell receptor-independent stimuli trigger immunoglobulin (Ig) class
switch recombination and production of IgG autoantibodies by anergic self-
reactive В cells / T.G. Phan, M. Amesbury, S. Gardam et al. // J. Exp.Med. -
2003. - Vol.197. - N7. - P. 845-860.

139

135. Blecher M. Receptors, antibodies, and disease./ M. Blecher // Clin
Chem.- 1984.- Vol.30.-P. 1137-1156.

136. Bonvet JP. From natural polyreactive autoantibodies to a la carte
monoreactive antibodies to infectious agents: is it a small world after all? /
J.P. Bonvet, G. Dighiero // Infection, and Immunology. - 1998. - Vol. 66, N
l.-P. 1-4.

137. BoydenS.V. Natural antibodies and the immune response /
S.V. Boyden // Advanc. Immunol. - 1996. - Vol. 24, N 5. - P. 1-28.

138. BoyumA. Separation of leucocytes from blood and bone marrow /
A. Boyum // S. Cand. I. Clin. Lab. Invest. - 1968. - V.21. - P. 97.

139. Brusca I. Presence of antinuclear antibodies and coronary heart disease
/1. Brusca, F.M. Sarullo, M. Fazio // Ann. Rheum. Diseases. - 2002. -Nil.-
P. 1038.

140. Campbell P.N. Some thoughts on the discovery of autoimmunity /
P.N. Campbell // Нейрохимия. - 2002. - № 4. - С. 313-314.

141. Cancer and immunity: Autoimmune and rheumatic features in patients /
M. Abu-Shakra, D. Buskila, M. Ehrenfeld, K.Conrad // Ann. Rheum.
Diseases. -2001.-N5. -P. 428-440.

142. Casilio-Rosen L. Surface bieds on apoptotic cells are sites of enhanced
procoagulant activity-imolications for coagulation events and antigenic
spread in systemic lupus erythematosus / L. Casilio-Rosen //Proc. nat. Acad.
Sci. USA.- 1996. - Vol. 93. - P.1624-1629.

143. Characterization of lymphocyte surface markers in patients with
vitiligo / Jean M. Salmasi, N.I. Kharitonova, A.N. Kazimirsky et al. //Russ. J.
Immunol. - 2003. - N1. - P. 48-52.

144. Characterization of regulatory responses to human autoantigens /
M. Hall Andrew, S. Cairns Linsay, G. Phelps Richard et al. // Scand. J.
Immunology. - 2001. - № 2. - P. 56.

140

145. Correlation of cytokine serum profile with clinical status in Graves's
disease / S. Negree, D. Drugarin, I. Zosin et al. // Rom. Arch. Microbiol. and
Immunol. - 2002. - N 1-2. - P.46-47.

146. D'Cruz D. Autoimmne diseases associated with drugs, chemicals and
environmental factors / D. D'Cruz // Toxicol. Lett. - 2000. - №2. - P.421-432.

147. Diagnostic value of autoantibodies detection in autoimmune diseases /
S. Rogos, P. Ciurea, C. Avramescu et al. // Scan. J. Immunol. - 2001. - T.54,
№1.-P. 63.

148. Effect of anti-thyroxin autoantibodies on radioimmunoassay of free
thyroxin in serum / J. Konishi, Y. Lidan, T. Kouska et al. // Clin. Chem. -
1982-Vol. 28.-P. 1389-1391.

149. Endogenous retro viruses and autoimmunity: Adstr. 23^rd Meet. Eur.
Tumor Virus. Group (Paris. 9-12 June. 1999) //Virus Res. - 1999. - Vol. 62,
Nl.-P. 9.

150. Enzyme-linked immunosorbent assay for determination of
thyroglobulin autoantibodies. Comparison with RIA and haemagglutination. /
M. Hoier-Madsen, U. Feldt-Rasmassen, L. Hegediis et al. // Acta Pathol.
Microbiol. Immunol. Scand. - 1984. -Vol. 92 - P. 377-382.

151. Ferguson E. Generation and initial characterization of a novel
polyclonal antibody directed against homocysteine thiolactone-modified low
density lipoprotein./E. Ferguson, S. Parthasarathy, J. Josef, B. Kalyanaraman
// J.Lipid Res. - 1998. - Vol. 39, N 4. - P. 925-933.

152. Forsea D. Autoimmune urticaria / D. Forsea, M. Gavrila, O. Jinga //
Rom. Arch. Microbiol. and Immunol. - 2002. - N 1-2. - P.17-18.

153. Fridman J. Human thrombin autoantibodies./ J. Fridman // Thromb.
Res. - 1978. - Vol.13. - P. 681-688.

154. Functionally distinct lymphocytes that secrete IgM autoantibodies /
K. Heyakawa, R.R. Hardy, M. Honda et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. U S A. -
1984. - Vol. 81. - P. 2494-2498.

141

155. Genetic basis for the cross-reactive idiotypes on the light chains of
human IgM anti-IgG autoantibodies / P.P. Chen, K. Albrandt, N.Y. Orida et
al. // Proc. Nat. Acad. Sci. U S A. - 1986 - Vol. 83. - P. 8318-8322.

156. George J. The emerging concept of pathogenic natural autoantibodies./
J.George, B. Gildurd, Y. Shoenfeld // Human Antibodies - 1997. - Vol. 8. - N
2-P. 70-75.

157. Giang Phan T. Autoantibodies to extractable nuclear antigens: Making
detection and interpretation more meaningful / Phan T. Giang, Richard
C.W.Wong, Stephen Adelstein // Clin. and Diagn. Lab. Immunol. - 2002. -
Vol. 9, N1,-P. 1-7.

158. Gilbert В., Dighiero G., Avrameas S. /Naturally occurring antibodies
against nine common antigens in human sera. I. Detection, isolation and
characterization./ B. Gilbert, G. Dighiero, S. Avrameas // J. Immunol. — 1982.
-Vol. 128.-P. 2779-2787.

159. Grabar P. Hypothesis. Auto-antibodies and immunological theories: an
analytical review. / P.Grabar // Clin. Immunol. Immunopathol. — 1975. — Vol.
4.-P. 453-466.

160. Guo M. Zhongguo xiandai yixue zazhi / M. Guo // China J. Mod. Med.
- 2002. - Vol. 12, N5. - P. 25-26

161. Hansson M. Xenobiotic metal-induced autoimmunity / M. Hansson, M.
Abedi -Valugerdi // Clin. and Exp. Immunol. - 2003. - N 3. - P. 405-414.

162. Hardy R.R. Rheumatoid factor secretion from human Leu-1+ В cells /
R.R. Hardy, K. Hayakawa, M. Shimisu // Science. - 1987.-Vol. 236. - P. 81-
83.

163. Heterogeneity of antinuclear antibodies in primary biliary cirrhosis/
M. Cojocaru, M. Ion, S. Iacob et al. // Scan. J. Immunol. - 2001. - №54. -
P.60.

164. High frequency of autoantibodies bearing cross-reactive idiotopes
among hybridomas using VH7183 genes prepared from normal and

142

autoimmune murine strains./ B. Bellon, A. Manheiomor-Lory, M. Monestier. et al. // J. clin. Inest. - 1987. - Vol.79. - P. 1044-1053.

165. Hooper B. Autoimmunity in a real community / B. Hooper, G. Frion,
P. Chandra // Clin. Exp. Immunology. - 1972. - Vol.12, N 1. - P. 79-83.

166. Human lymphocytes making rheumatoid factor and antibody to ssDNA
belong to Leu-1+ B-cell subset / P. Casali, S.E. Durastero, N. Necamura et
al. / Science. - 1987. - Vol. 23 6. - P. 77-81.

167. Identification of peptides binding to IgG in the CSF of multiple
sclerosis patients./1. Cortese, S. Capone, L.M. Grimaldi et al. // Mult. Scler. -
1998. - Vol. 4, N1.- P. 31-36.

168. Importance of IgG4 autoantibody in patients with pemphigus vulgaris
from southern iran / M. Ayatollahie, Z. Malekhosseini, S. Jubeh et al. // Scan.
J. Immunol. - 2001. - № 54. - P. 88.

169. Immunochemical and functional characterization of an agonist-like
monoclonal antibody against the M2 acetylcholine receptor / R. Elies,
L.X. Fu, P. Eftekhari et al. // Eur. J. Biochem. - 1998. - Vol. 251, N 3. - P.
659-666.

170. Innate natural antibodies. Primary roles indicated by specific epitopes.
// T.C. Rodman, E Stephen, JJ. Sullivan, R. Winston // Hum. Immunol. -
1997.-Vol. 55, N2.-P. 87-95.

171. Insulin autoantibodies in the pre-diabetic period: correlation with islet
cell antibodies and development of diabetes. / B.N. Dean, F. Becker,
J.M. Monelly et al. // Diabetologia. - 1986. - Vol. 29. - P. 339-342.

172. Interference in radioimmunoassay of total serum thyroxin and free
thyroxin due to thyroxin-binding autoantibodies / C.G. Bhagat, P. Garcia-
Wob, F. Watson, G.P. Beilly // Clinical Chemistry. - 1983. - Vol.29. - P.
1324-1325.

173. Interleukin 10 influences autoimmune response in primary Sjogren's
syndrome and linked to IL-10 gene polimorhism / J.-M. Anaya, P.A. Correa,
M. Herrera et al. // J. Rheumatology. - 2002. - N 9. - P. 1874-1876.

143

174. Jackson S. Normal human sera contain antibodies directed at Fab of
IgA./ S. Jackson, R.J. Montgomery, C. Cnerkinsky // J. Immunol. - 1987. -
Vol. 138.-P. 2244-2248.

175. Kandiach D.A. Anti-beta2-glycoprotein I and anti-prothrombin
antibodies in patients with the 'antiphospholipid' syndrome: immunological
specificity and clotting profiles / D.A. Kandiach, S.A. Krilis // Lupus. - 1998.
-Vol. 7.-P. 323-332.

176. Kasjanova A. Antibodies against ssDNA in persons of various age. /
A. Kasjanova, L. Cebecauer, V. Balaz // Mechanisms of ageing and
development. - 1984. - Vol. 28. -P. 289-295.

177. Kimber I. The immunologic basis for autoimmunity and the potential
influence of xenobitics /1. Kimber // Toxicol. Lett. - 2001. - Vol. 123, №1. -
P.3.

178. Lake R. Toward a serological assessment of mesothelioma / R. Lake,
С Robinson, J. Creaney, B. Robinson // Scand. J. Immunol. — 2001. - № 2. —
P. 73.

179. Manchini G. Immunochemical. Quanitation of antigens bi the single
radial immunodiffusion / G. Manchini, A.O. Carbonara, I.F. Heremans //
Immunochemistry. - 1965. - V. 2. - P. 235-254.

180. Matthas H. Juvenil autoimmune diabetes: A pathogenic role for
maternal antibodies? / H. Matthas, B. Jean-Francois // Nature Med. - 2002. -
N4.-P. 331-333.

181. Mohanalingam U. Double stranded DNA antibody estimation for the
diagnosis of systematic lupus erythematosus [corrected] / U. Mohanalingam,
E. Mathai, G. Sridharan // Indian J. Pathol. Microbiol. - 1994. - Vol.38. - P.
37-38.

182. Monestier M. Shared idiotypes and restricted immunoglobulin variable
region heavy chain genes characterize murine autoantibodies of various
specificities./ M. Monestier, A. Loiry, B. Bellen // J. Clin. Invest. - 1986. -
Vol.76. P. 753-759.

144

183. Mountz J.D. Significance of increased circulating proteasome in
autoimmune disease / J.D. Mountz // J. Rheumatol. - 2002. - Vol. 29, N10. -
P. 2027-2030.

184. Murine hybridomas secreting natural monoclonal antibodies reacting
with self antigens./ G. Dighiero, P. Lymberi, J.C. Masie et al. // J. Immunol. -
1983. - Vol. 131 -P. 2267-2272.

185. Natural (antiphospholipid-PDH,-DNA) autoantibodies and their
physiologic serum inhibitors / M. Lorber, Kra-Oz Z., B. Guilbrud et al. // Isr.
J. Med. Sci.-1995. - Vol. 31. -N 1. - P. 31-35.

186. Neeley W.E. Polyclonal 3,5,3'-triiodothyronine (T3) antibodies in a
euthyroid woman and their effect on radioimmunoassays for T3. / W.E.
Neeley, N.N. Alexander // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1983. - Vol. 57. - P.
851-854.

187. Nishimura S. Positivity for antinuclear antibody in patients with
advanced rheumatoid arthritis./ S. Nishimura, K. Nishiya, N. Hisakawa //
Acta Med. Okayama. - 1996. - Vol.50. - P. 261-265.

188. Nucleoporin p62 antibodies in a case of mixed connective tissue
disease / D. M. Kraemer, M. R. Kraus, K. Cneitz, T. Hans-Peter //Clin. and
Diagn. Lab. Immunol. - 2003. - N 2. - P. 329-331.

189. Ohmori H. Mechanisms leading to autoantibody production: link
between inflammation and autoimmunity / H. Ohmori, N. Kanayama // Curr.
Drug. Targets Inflamm. Allergy. - 2003. - P. 232-241.

190. Ortega E. Natural DNP-binding immunoglobulins and antibody
multispecificity./ E. Ortega, N. Kostovetsky, C. Larralade // Mol.Immunol. -
1984-Vol. 21-P. 883-888.

191. Pathogenesis of rheumatic manifestations in patients with chronic
hepatitis С / M. Pijak, F. Gazdik, E. Jahnova et al. // Scand. J. Immunol. -
2001.-Vol. 54, № 1.-P.56.

192. Plotz P.H. Autoantibodies are anti-idiotype antibodies to antiviral
antibodies / P.H. Plotz // Lancet. - 1983. - Vol. 2. - P. 824-826

145

193. Polyspecific monoclonal lupus autoantibodies reactive with both
polynucleotides and phospholipids / E.M. Lafer, J. Rauch,

Ch. Andrezejewokti et al. // J. Exp. Med. - 1981 - Vol. 153. - P. 897-909.

194. Predictive testing for pathogenic autoimmunity: The morphological
approach / C.F. Kuper, H.-J. Schuurman, M. Bos-Kuijpers, N. Bloksma //
Toxicol. Lett. - 2000. - № 2 . - P. 433-442.

195. Predominant autoantibody by early human B-cell precursors /

H. Wardemann, S. Yurasov, A. Schaefer, J.W. Young // Science. - 2003. - № 2.- P. 1374-1377.

196. Prevalence of thyroid hormone autoantibodies in healthy subjects /
S. Sakata, M. Matsuda, T. Ogawa et al. // Clin.Endocrinol (Oxf) - 1994 - Vol.
41 -N3-P. 365-370.

197. Qiang Li Xibei guofang yixue zazhi / Li Qiang, Gao Tian-wen, Wang
Dong-qing // Med. J. Nat. Def. Forses Northwest China. - 2002 - Vol.23, N6.

- P. 452-454.

198. Radoi M. Immune inflammatory mechanisms in atherosclerosis /
M. Radoi, I. Agache // Rom. Arch. Microbiol. and Immunol. - 2002. - N 1-2 -
P. 37-38.

199. Reduced factor XII levels in patients with the antiphospholipid
syndrome are associated with antibodies to factor XII / D.W. Jones, M.J.
Gallimore, I.J. Mackie et al. // Br.J.Haematol. - 2000. - Vol. 110. - P. 721-
726.

200. Regner M. Cross-reactivity in T-cell antigen recognition / M. Regner //
Immunology and Cell Biology. - 2001. -N 2. -P. 91-100.

201. Ridgway W.M. A new look at MHC and autoimmune disease / W.M.
Ridgway, M. Fasso, C.G. Fathman // Science. - 1999. - N 5415. - P. 749-751.

202. Sansonno D.E. An enzyme-linked immunosorbent assay for the
detection of autoantibodies to albumin / D.E. Sansonno // J.Immun. Methods

- 1986. - Vol. 90 - P. 131-136.

146

2O3.Saxena A. Allosteric control of acetylcholinesterase activity by monoclonal antibodies / A. Saxena, R. Hur, B.P. Doctor //Biochemistry - 1998 - Vol. 37-Nl-P. 145-154.

204. Schwartz M. Autoimmunity can benefit sef-maintenance /

M. Schwartz, I. R. Cohen // Immunol. Today. - 2000. -N 6. - P. 265-268.

205. Schwartz R.S. Origins of anti-DNA autoantibodies / R.S.Schwartz //
J.CIin. Invest. - 1985 - Vol. 75, N2. - P. 321-327.

206. Semple J.W. Immune pathophysiology of autoimmune
thrombocutopenicpurpura/ J.W. Semple //Blood Rev. - 2002. -N1.-P.9-
12.

207. Serum of normal subjects contains IgG with antibody-like specificity
for phospholipids / V. Pengo, A. Ruffati et al. // Folia Haematol.Int. Mag.
Klin. Morphol. Blutforsch - 1984. - Vol 111 - P. 681-685.

208. Smith H.R., Steinberg A.D. Autoimmunity - a perspective /

H.R. Smith, A.D. Steinberg // Annu.Rev.Immunol. - 1983 - Vol.l - P. 175-210.

209. Souan ML M. Detection of anti-acetylcholine antibodies in myasthenic
patients / M. Souan Neurosci. Lett. - 1986. - Vol. 64. - P. 23-28.

210. Stoy N.S. Monocyte/macrophage initiation of organ-specific
autoimmunity /N.S Stoy // Med. Hypotheses. - 2002. - N4. - P. 312-326.

211. Suchkov S. Two ways of controlling the cell deaths in systemic lupus
erythematosus / S. Suchkov, A. Gabibov // International Congress of
Immunology. - Stockholm, 2001. - Vol. 54. -P. 17.

212. The mechanism behind increased susceptibility of systemic lupus
erythematosus / K.H. Traustadottir, A. Sigfusson, K. Steinsson, K.Erlendsson
III. Rheumatol. - 2003. - N 11. - P. 2359-2366.

213. Thirty-six human monoclonal immunoglobulins with antibody activity
against cytoskeleton proteins, thyroglobulin, and native DNA: immunologic
studies and clinical correlations. / G. Dighiero, B. Guilbert, J.F. Fermand et
al. // Blood. -1983. - Vol. 62. - P. 264-270.

147

214. Thomas J.W. The natural autoantibody repertoire of nonobese diabetic
mice is highly active / J.W. Thomas, P.L. Kendall, H.G. Mitchell //
J.Immunol. - 2002. - Vol.169. - N11. - P. 6617-6624.

215. Thompson C.B. Apoptosis in pathogenesis and treatment of disease /
C.B. Thompson// Science. - 1995.- Vol. 267-P. 1456-1462.

216. ViguierM. Des functions immunitaires de'clinantes / M. Viguier,
D. Fradelizi // Diofutur. - 2001. - С 22-24.

217. Voinea С Autoimmunity and parasitic infections / C. Voinea // Rom.
Arch. Microbiol. and Immunol. - 2000. -N 4. - P. 288-289.

218. Whitacre Carolin C, Reingold Stephen C.,0'Looney Patricia A. - A
gender gap in autoimmunity / C.C. Whitacre, S.C. Reingold, P.A. O'Looney
//Science.-1999.-N5406.-P. 1277-1278.

219. XugentDJ. Childhood immune thrombocytopenic purpura/
D J. Xugent // Blood Rev. - 2002. - N 1 - P.27-29.

220. Yoshihara K. Kyorin igakkai zasshi / K. Yoshihara // J. Kyorin Med.
Soc. - 2001. - N4. - P. 427-437.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2 Корреляционные взаимосвязи аутоантител с изучаемыми параметрами иммунитета у больных людей


	На главную \| В открытую библиотеку

-Переход в полный каталог почтовой службы рассылки диссертаций-